Fare embriyonik kök hücrelerinden kondrosit farklılaştırılması ve mezenkimal kök hücrelerden farklılaştırılan kondrositlerle karşılaştırılması

Abstract

Bu projede her iki hücre kaynağının da kullanılması düşünülmüş olup in vivo karşılaştırılmasının yapılması planlanmıştır. Çalışmada, eş zamanlı olarak stok embriyonik kök hücre ile fare kemik iliğinden alınan mezenşimal kök hücrelerin uygun ortamda kültürleri yapıldıktan sonra her iki kök hücre kaynağından kondrosit farklılaştırılması yapılmıştır. Kondrosit farklılaştırması için hazırlanan hücre kültür ortamına %1 ITS(insulin transferrin, selenium), 10 ng/ml BMP-2 (bone morphogenetic protein-2), 10 ng/ml TGF-ß1 (transforming growth factor-ß1) ve 50 µg/ml askorbik asit ilave edilmiştir. Hücrelerin karakterizasyonu için indirekt immunohistokimyasal teknik kullanılarak anti-aggregan, anti-kollajen II ve anti-Sox9 dağılımları bakılmıştır. Elde edilen verilere dayanarak farklılaşma kapasiteleri ve farklılaşma hızları karşılaştırılmıştır. Farklılaştırılan kondrosit hücreleri fare bacak kas dokusu içerisine verilerek hücrelerin, in vivo ortamdaki uyumu ve devamlılığı gözlenmiştir. Hücrelerin fare bacak kasına enjeksiyonu yapıldıktan sonraki 15. Günde enjeksiyon yapılan bölgeden biyopsi alınarak rutin parafin takip işleminden sonra kesitler hematoksilen eozin ve mason trichrom boyamaları yapılarak histokimyasal analiz yapılmıştır.Anahtar sözcükler: Embriyonik kök hücre, Mezenkimal kök hücre, Kondrosit, İn vivo.

This study, embryonic stem cell from stock and mesenchymal stem cells from bone marrow of a mouse will be culture in their convenient culture, 1% ITS, 10 ng / ml BMP-2, 10 ng / ml TGF-ß1 and 50 mg / ml ascorbic acid would be added in the cultures for chondrocyte differentiation with Using indirect immunohistochemical techniques for characterization of cells, distribution of anti-aggregan, anti-collagen II and anti-Sox9 was checked. Based on the data obtained, the capacity and the rate of their differentiation was compared. The differantated cells were transplanted into the leg muscle of the mice and further examined for their compatibility and survival in vivo. On the 15th day after the transplantation, a biyopsy was taken from the region of implant and processed with routine parafin embedding procedure, subsequently histochemical analysis was perform with hematoxylin eosin and masson trichrom staining on the paraffin sections.Keywords: Embryonic stem cell, Mesenchymal stem cells, Chondrocyte, İn vivo.