Otofaji inhibitörü chloroquine uygulamasının, ipek böceği Bombyx mori`nin larval-pupal metamorfoz sürecinde, posterior ipek bezine olan etkilerinin araştırılması.

Abstract

Holometabol böceklerde larval-pupal metamorfoz sırasında larvaya özgü doku ve organların dejenrasyonu programlı hücre ölümü yolu ile gerçekleşmektedir. İpek böceği, Bombyx mori'de bulunan ve larvaya özgü bir doku olan posterior ipek bezinin dejenerasyonu, hemolenfteki ekdisteroid seviyesinin artışına bağlı olarak otofaji ve apoptoz mekanizmalarının birlikteliği ile meydana gelir. Posterior ipek bezi ile yapılan çalışmalarda, otofajik hücre ölümünün prepupal dönemde görüldüğü, apoptozisin ise pupa aşamasının erken safhasında meydana geldiği belirtilmektedir.Yapılan çalışmada, larval-pupal metamorfoz sürecinde ipekböceği Bombyx mori posterior ipek bezinde otofajinin rolü araştırılmıştır. Bu amaçla, 5. larval evrenin 7. ve 8. günlerinde otofaji inhibitörü olan klorokuin iki farklı dozda uygulanmış ve posterior ipek bezine olan etkileri incelenmiştir. Uygulamalar sonrasında Bradford yöntemi ile posterior ipek bezindeki total protein miktarı ve lizozomal bir enzim olan asit fosfatazın aktivitesi belirlenmiştir. Hematoksilen & eozin boyama ile boyanan posterior ipek bezine ait kesitler ışık mikroskobu altında incelenerek larval-pupal metamorfoz sırasında posterior ipek bezinde meydana gelen morfolojik değişimler gösterilmiştir.

Remodeling or completely elimination of larvae-specific tissues and organs in holometabolous insects occur with programmed cell death during larval-pupal metamorphosis. The degeneration of the posterior silk gland, which is a larval-specific tissue in the silkworm, Bombyx mori, occurs with interaction of autophagy and apoptosis mechanisms due to an increase in the level of ecdysteroid in the hemolymph. Studies in the posterior silk gland showed that, while autophagic cell death occurs during prepupal stage, apoptosis is observed in the early phase of pupa stage. In this study, the role of autophagy in silkworm, Bombyx mori posterior silk gland was investigated during larval-pupal metamorphosis. For this purpose, two different doses of chloroquine which is an autophagy inhibitor, was applied during the day 7 and 8 of the fifth larval stage and then its effects on posterior silk gland was examined. The total protein amounts of the posterior silk gland were determined by Bradford protein assay and the activities of the lysosomal enzyme acid phosphatase was detected. The posterior silk gland tissue sections which were stained with hematoxylin eosin were observed under light microscope and, morphological changes in the posterior silk gland during larval-pupal metamorphosis were shown.