İzmir ve civarındaki phlebotomus sp.`lerde ELISA ve izoenzim elektroforezi kullanılarak leishmania promastigotlarının saptanması

Abstract

ÖZET 1990 ve 1991 yıllan Haziran-Ekim ayları arasında hint yağlı kağıt ve ağız aspiratörü kullanılarak İzmir ve civarında tesbit edilen 15 bölgeden, 3237 erkek, 1112 dişi olmak üzere toplam 4349 Phlebotomus sp. toplanmıştır. Dişi Phlebotomus'lar farinks armatürü ve spermateka yardımıyla türlerine ayrılmış ve Ph.papatasi'nin 382 (%343), Ph.sergentfmn 519 (%46.6), Ph.alexatidrfmn 78 (%6.1)' Ph.major'un 128 (%11.5) ve Ph.perfHiewVnm 5 (%0.4) tane olduğu saptanmıştır. Bunlar her türden ve bölgeden ayrı ayrı olmak üzere 5'erli gruplar halinde mikrosantrifüj tüplerinde PBS+Tw20 içinde ezme+dondurma-eritme yoluyla suspense edilmiş ve toplam 232 örnek tüpü oluşturulmuştur. Leishmania mexicana panamensis'in yüzey antijeni olan gp63'e karşı elde edilmiş poliklon antikor ile kaplanan mikroplaklarda bu Phlebotomus süspansiyonları antijen olarak kullanılarak Promastigot-ELISA testi çalışılmıştır. En az 1000 promastigotu seçebildiği ve türe özgü olmadığı saptanan testte Ph.major'/aıâan en az 3 (%2.34) tanesinin ve Ph.papatasi1eıden en az 3 (%0.98) tanesinin Leishmania sp. promastigotları yönünden pozitif olduğu saptanmıştır. Bu sonuçlara göre araştırma kapsamına giren İzmir Bölgesinde Kala-Azar'ın vektörü olarak Ph.major ve Ph.papatasi'mn suçlanmaları gerekliliği ortaya çıkmıştır.. Çalışmamızda kullanılacak olan İzoenzim Elektroforezi, Phlebotomus süspansiyonlarının bulunduğu tüplerde iyi sonuç vermemiş, fakat Anabilim Dalımızda bulunan ve testte kullandığımız Leishmania susunun L.infantum,MONl olduğunu saptamak için kullanılmıştır.

SUMMARY A total 4349 Phlebotomus sp., ( 3237 male, 1112 female ) were collected from İzmir and 15 provinces in 1990 and 1991, between June-October, by using sticky paper traps and mouth aspirators. Female Phlebotomus were classified according to their pharynx and spermatecha. There were 519 ( % 46.6 ) Ph.sergenti, 382 ( % 34.3 ) Ph.papatasi, 78 ( % 6.1 ) Ph.alexandri, 128 ( % 11.5 ) Ph.major and 5 ( % 0.4 ) Ph.perfiliewi. Phlebotomus were suspended in microcentrifuge tubes in groups of 5, according to their species and regions collected. 232 tubes were prepared by freezing-thawing after grinding in PBS + Twee n 20. Microplates covered with polyclonal antibody against a surface antigen gp63 of L. mexicana panamensis and Phlebotomus suspensions were used as an antigen to perform promastigot-ELISA test. This test was found to be no species specific and as few as 1000 Leishmanial promastigotes could be detected. 3 groups prepared from 382 Ph.papatasi and 3 groups prepared from of 128 Ph.major were found to be positive meaning at least one phlebotomus from each group was positive for Leishmanial promastigotes by ELISA. Ph. papatasi and Ph. major must be incriminated as vectors for İzmir region. Isoenzyme electrophoresis, couldn't be successfully performed in the tubes with Phlebotomus suspensions, but it is used to identify the Leishmania strain used in our studies which is identified as L.infantum, MON1.