Fragil x sendromu olgularında sitogenetik tanı yöntemlerinin karşılaştırılması

Abstract

ÖZET Bu çalışmada, frajil X kromozomunun sitogenetik analizi için uygulanan yöntemlerden, koşullarımıza en uygununu belirlemek amaçlanmıştır. Materyel olarak, Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Anabilim Dalı, Genetik Bilim Dalı, Psikiyatri Anabilim Dalı, Çocuk Polikliniği ve Nöroloji Anabilim Dalı, Çocuk Nörolojisi Polikliniği' inden bize Frajil X Sendromu ayırıcı tanısı için gönderilen hastaların perıferik venöz kanlan kullanıldı. 47 hastadan kültür yapıldı. Üç değişik yöntem uygulandı. Bu yöntemler ; 1- RPMI 1640 kültür ortamına metabolik inhibitör olarak metotreksat ilavesi yapıldı. Ayrıntıları gereç - yöntem kısmında verilmiş olan prosedürle bu yöntemde en optimal sonuç elde edildi. Ancak üreme yeterli bulunmadı. Ortalama mitotik indeks kaynaklara göre yetersiz bulundu. 2- Kültür ortamı olarak Medium 199 kullanıldı. Bu kültür ortamının işlevi folik asiti yetersiz içerme temeline dayanmaktadır. Elimizde yeterli miktarda olmaması nedeniyle, bu ortamla az sayıda çalışma yapıldı. 3- Kültür ortamı olarak kullanılan Modifıye RPMI 1640 ortamının işlevi Medium 199' a benzemektedir. Ancak bu ortamda folik asit hiç bulunmamaktadır. Bu nedenle pirimidin biyosentezinı inhibe etme etkisi daha güçlüdür. Uygulanan prosedürün ayrıntıları gereç - yöntem kısmında verilmiştir. Bu yöntem ile başarılı sonuçlar alınmıştır. Prosedür açısından Medium 199 ile Modifıye RPMI 1640 kültür ortamlarında fetal calf serumu oranlan göreceli olarak düşük tutulmuştur. 48. saatte MTX ilaveli RPMI 1640 kültür ortamı ile 26, Medium 199 ile 4, Modifıye RPMI 1640 ortamı ile 49 çalışma yapılmıştır. En uygun yöntem, yapılan bu çalışmalar sonucu prosedür 3 bulunmuştur. Standardize edilen direk boyama ve bantlama prosedürü gereç - vontem kısmında belirtilmiştir Bize başvuran hastalardan öncelikle yapılan pedigri analizinin sonuçlan, bulgular kısmında tablo 2 de gösterilmiştir. Daha sonra yapılan sitogenetik analizinde toplam 30 hastada yapısal frajil bölge saptandı. Bu frajil bölgelerin kromozomal yerleşimleri ve kaç hastada görüldükleri bulgular bölümüde tablo 4' de verilmiştir. X q23' de yerleşmiş olan kalıtsal Frajil X Sendromu bölgesi, çalışma sırasında gözlenememiştir. Ancak Xq27.3 ile birlikte en sık tespit edilen 3pl4 ve 16q23 yapısal frajil bölgeleri, sırasıyla 9 hastada ve 5 hastada gözlenmiştir. Ayrıca bu bölgeler, bulgular bölümünde resim 3 ve resim 5 ' de gösterilmiştir. <£>

SUMMARY In this study, it to find out the most convenient method for the diagnosis of fragile - X syndrome is aimed. Forty seven patients who were referred to Department of Ege University of Medical Biology from Department of Pediatrics and Department of Psychiatrics for the differential diagnosis of fragile - X were investigated cytogenetically. Three different culture medium and methods were used. 1 - RPMI 1640 medium was used and Methotrexat was added as metabolic inhibitor. Optimal results were obtained with this method which is described detailly in material and methods. But average mitotic index was low. 2 - Medium 199. This medium contains low level of folic acid. Very few studies could be done with this medium because we had small amount of medium 3 - Modified RPMI 1640. This medium is similar to Medium 199. But there is no folic acid in it. Modified RPMI 1640 inhibits pyrimidine biosynthesis more than the other mediums do. Detailed information about this method was given in material and methods. Successful results were obtained with this method. Fetal calf serum was relatively low level in this medium. Thirteen, 4 and 40 chromosomal analyses were done with the first, second and third methods, respectively. The third method was found to be the most convenient method to investigate the fragile site of chromosomes. Standard methods were applied for staining and banding. Pedigree analysis of patients were given in table 2. Cytogenetic studies revealed fragile site on chromosomes of 28 patients No patient had a fragile site on X q27.3 which is specific for fragile X syndrome. But some other fragile sites ( 3 pi 4. 16 q23 ) that show the method is right were observed in 14 patients. These fragile sites were shown figure 3 and 5.