Sirotik sıçanlarda karaciğer plazma membran değişikliklerinin marker enzimlerle belirlenmesi

Abstract

88 ÖZET Plazma membranlarının izolasyon ve karakterizasyonuna yaklaşım ilk kez 1960'lı yıllarda gerçekleştirilmiştir. Plazma membranlan hücresel metabolizma düzenleniminde, hücre farklılaşma ve büyümesinde çok önemlidirler. Bu çalışmanın birinci amacı sıçan karaciğer plazma membranlannın saf olarak eldesi, saflığın elektron mikroskobu ve marker enzimlerle kamtlanmasıdır. İkinci amacı ise CCİ4 ile in vivo karaciğer sirozu oluşturulan sıçanlarda kara ciğer plazma membran eldesi, marker enzim analizlerinin yapılması ve membran lipid kompozisyonundaki olası değişikliklerin membranda kolesterol fosfolipid ölçümleri ile belirlenmesidir. Çalışmada Neville, Kamath ve Chandrasekhara yöntemlerinde yapılan modi fikasyon ile elde edilen plazma membranlannın saflığı elektron mikroskobu ile gösterilmiştir (Resim 2,3,4). Membran fraksiyonlarında yapılan marker enzim analizleri ile de saflık biyo kimyasal olarak kanıtlanmıştır. In vivo CCİ4 uygulaması ile sıçanlarda siroz oluşturulmuş ve sirotik sıçanların plazma membranlannda membrana bağlı enzimlerde anlamlı inhibisyon (p<0.0001) saptanmıştır. Membranda kolesterol/fosfolipid değerleri CCİ4 uygulanan grupta kontrol ve mısıryağı grubuna göre anlamlı yüksek (p<0.001) bulunmuştur. Bulgularımız plazma membranlannda CCİ4 'ün peroksidatif etkisiyle gelişen yağ asidi kompozisyonunda ve kolesterol içeriğindeki bu değişikliklerin enzim aktivitelerini etkileri doğrultusundaki görüşleri desteklemektedir.

89 SUMMARY The isolate-and-characterize approach was first applied to plasma membranes around 1960. The plasma membrane surrounding living cells plays a role in intra cellular metabolism, cell differentiation and growth. The first aim of the present work was to obtain pure liver cell plasma membranes and to prove the purity of these fractions by electron microscopy and marker enzyme analysis. The second aim of this work was to obtain liver cell plasma membranes of CCİ4 treated rats and to observe the changes in membrane lipid composition by measuring the levels of cholesterol and phospholipids membrane fractions. By the modified method of Neville, Kamath and Chandrasekhara, the purity of the obtained rat liver cell plasma membrane fractions was proved by electron microscopy (Fig 2,3,4). Marker enzyme analysis also indicated that these fractions were very pure. There was a significant decrease (p<0.0001) in membrane bound enzyme ac tivities in cirrhotic rats treated with CCİ4 and we also found an increase ratio of cholesterol/phospholipid content of plasma membrane fractions of CCU treated rats. Our results support the thought that, alteration in fatty acid composition and cholesterol content of rat liver plasma membrane fractions caused by the pe- roxidative effect of CCİ4, cause an inhibition in the activities of membrane bound enzymes.