Kanda kannabinoidlerin analizinde idrar EMIT d.a.u tekniğinin kullanılması

Abstract

31 6. ÖZET Madde bağımlılığı özellikle 20. yüzyılın ikinci yansından itibaren tüm dünyada hızla artarak çok önemli bir toplumsal sorun niteliği kazanmıştır. Birçok ülkede yasalar ile kontrol altına alınmaya çalışılmasına karşın, uyuşturucu madde ticareti gençleri ve batta çocukları hedefleyerek bağımlı hale getirmekte, çeşitli suçlar işlenmesi, sosyal yıkıma ve hatta ölüme neden olmaktadır. Bu maddeler arasında en yaygın olarak kullanılan esrar (marijuana) dır. Ülkemizde esrarla ilgili olarak Türk Ceza Kanunun (TCK) 403. maddesinde uyuşturucu madde temini suçu, 404. maddesinde ise kullanma amacıyla bulundurma suçlan yer almaktadır. Adli olgularda (cinayet, cinsel saldınlar, trafik kazalan gibi), bu maddelerin çok düşük düzeylerin önemli olması, idrar elde edilemediği ve/veya uygun olmadığı durumlarda olası kullanılabilecek diğer biyolojik matriksler için etkili, hızlı ve güvenilir tarama metotlarının geliştirilmesi gerekliliğini ortaya çıkarmıştır. Bu yaklaşımlann sonucunda taramanın immunokimyasal yöntemlerle, sadece idrarda değil kanda da yapılabilmesi konusunda immunoassay cihazlan dizaynında değişiklikler, idrar kitlerinde adaptasyon şeklinde validasyon çahşmalan giderek artmaktadır. Bu çalışmada Enzyme-Multiplied Immunoassay Technique (EMIT) d.a.u idrar immunassay tekniğinin tam kana uyarlanması amaçlandı. Esrar analizinde gerekli standardın (THCCOOH) ülkemize ithal edilebilmesi için T.C. Sağlık Bakanlığından gerekli izin alındıktan sonra Birleşik Devletler Cerilliant firmasından Tetrahidrokannabinoi karboksilik asit (-)-ll-Nor-9-Carboxy-A9 temin edildi. Kan örneklerine uygulanacak uygun bir protein presipitasyon yöntemi belirlendi. Yapılan kalibrasyon çahşmalan sonunda kanda idrara göre çok daha düşük32 düzeyde bulunan THCCOOH için, idrarda verilen 50 ng/ml nin altında yüksek hassasiyet ve özgüllükte bir cutoff değeri (18.25 ng/ml) elde edildi. Sonuç olarak EMIT idrar kitleri ile hem idrar hem kanda ekonomik, hızlı ve güvenilir olarak THCCOOH taraması yapılabilmesi sağlandı.

33 ABSTRACT Drug abuse became a social problem increasingly since the second half of 20th. century. In many countries although attempts for controlling these drugs by laws are present, trading of narcotics targeted to youth and even children to become abusers, resulted in committing many crimes, social disaster and death. Among these drugs the most frequently used drug is marijuana. In our country, marijuana is governed by two articles of Turkish Penal Law as offence of obtaining narcotics and offence of obtaining narcotics for users in 403 and 404 articles respectively. Detection of these drugs in low concentrations in various legal events as murders, rapes, traffic accidents etc. is important. Widespread use of immunoassay technique for the screening of drugs of abuse in urine is based on its fast performance and good sensitivity. However, in many cases, immunological analysis of blood and serum is required, for example when no urine sample is available. Therefore numerous efforts have been made to develop efficient, rapid and reliable screening techniques for other available biological matrixes. As a result of these approaches numerous validation studies on differentiation immunoassay device designs and adoption of urine kits are present. In the present study, we aimed to test the direct applicability of Enzyme Multiplied Immunoassay Technique (EMIT d.a.u.) urine immunoassays to whole blood. After getting permission from Turkish Republic Ministry of Health, for importing the ll-nor-9-carboxy-tetrahydrocannabinol (THCCOOH), the standard imported from United States. Then a protein precipitation method was designed. As a result of calibration studies, given cutoff for urine (50ng/ml) was diminished as 18.25 ng/ml for whole blood since THCCOOH present in blood at lower concentrations.34 In conclusion, EMIT d.a.u. urine immunoassays can be used economically, rapidly and reliably for screening THCCÖOH in both urine and blood.