Peridontal ligament fibroblastlarının kök yüzeyine yapışmasının kolorimetrik yöntemler ve SEM ile değerlendirilmesi

Abstract

ÖZET Büyüme faktörleri (GF) periodontal ligament (PDL) hücrelerinin çeşitli hücresel fonksiyonlarını düzenleme yeteneklerinden dolayı son yıllarda ilgi odağı olmuştur. Trombosit kökenli büyüme faktörü (PDGF-BB) periodontolojide en çok çalışılan ve ümit verici sonuçlar veren GF'lerden biridir. Bu çalışmanın amacı, PDGF-BB'nin farklı ajanlarla demineralize edilmiş kök yüzeylerine uygulanması sonrasında PDL hücrelerinin kök yüzeylerine tutunmasımn değerlendirilmesidir. Periodontal hastalık nedeniyle çekim karan verilmiş alt anterior dişlerden hazırlanan 80 kök parçasına şu işlemler uygulandı: 1) Yalnızca kök yüzeyi düzleştirmesi (KYD) 2) KYD + PDGF-BB 3) KYD + sitrik asitle dağlama 4) KYD + sitrik asitle dağlama + PDGF-BB 5) KYD + tetrasiklin hidroklorür (T-HC1) ile dağlama 6) KYD + T-HC1 ile dağlama +PDGF-BB 7) KYD + diamin tetraasetik asit (EDTA) ile dağlama 8) KYD + EDTA ile dağlama + PDGF-BB. Her grupta bulunan toplam 10 kök parçasından 7'sinin yüzeyine, ortodontik nedenle çekilen premolar dişlerin kök yüzeylerinden elde edilerek üretilen PDL hücreleri ekilerek inkübe edildi. Diğer 3 kök parçasına hücreler ekilmeden aynı işlemlere tabi tutuldu. 2 saatlik inkübasyon süresi sonunda her kök parçasının bulunduğu göze (2,3)-bis(2- metoksi-4-nitro-5-sulfofenil)-5-[(fenilamm)-karbonil]-2H-tetrazolyum hidroksit (XTT) + ko-enzim Qo konularak ikinci bir inkübasyon uygulandı. Her gözden elden edilen solüsyon, mikro pleyt okuyucum spektrofotometrede ölçüldü. Absorbans eğrisi kullanılarak kök yüzeyine tutunan metabolik olarak aktif hücreler sayısal olarak belirlendi ve mm2'ye düşen hücre sayısı hesaplandı. Her gruptan hücre ekilmemiş 2 kök ve hücre ekilmiş 3 kök parçası taramalı elektron mikroskopta (SEM) incelendi ve farklı büyütmelerde görüntülendi. Sonuç olarak 8 farklı gruptaki kök yüzeylerine tutunan hücre sayıları arasında istatistiksel anlamlı fark bulunamadı. Ancak tutunan hücre sayılarının ortalamalarına bakıldığında en fazla hücrenin KYD + sitrik asitle dağlama + rPDGF-BB uygulanan kök yüzeylerine, en az hücrenin de KYD + T-HCL ile dağlama + rPDGF-BB uygulanan kök yüzeylerinetutunduğu görüldü. Periodontal hastalığa maruz kalmış kök yüzeylerinin PDL hücrelerinin tutunması için biyouyumlu hale getirilmesinde KYD en önemli uygulamadır. PDGF-BB uygulaması öncesinde kök yüzeylerinin sitrik asitle demineralizasyonu periodontal rejenerasyonu desteklemek amacıyla kullanılabilir. 62

ABSTRACT Several growth factors (GF) have recently received attention because of their ability to regulate various cellular functions of periodontal ligament (PDL) cells and have been used for the regeneration of the periodontal tissues. Platelet derived growth factor (PDGF) has been the most thoroughly described growth factor and promising results have been obtained by using mis GF. The aim of this study was to evaluate the effects of PDGF-BB application to the root surfaces demineralized with different agents, on the periodontal cell attachment. Eighty root slices obtained from the lower anterior teeth that had been extracted due to the periodontal disease and was subjected to one of the following treatments: 1) Only root planing 2) root planing + PDGF-BB 3) root planing + citric acid demineralization 4) root planing + citric acid demineralization + PDGF-BB 5) root planing + tetracyclin HC1 (T-HC1) demineralization 6) root planing + T-HCL demineralization + PDGF-BB 7) root planing + ethylenediamine tetra-acetic acid (EDTA) demineralization 8) root planing + EDTA demineralization + PDGF-BB. Human PDL cells acquired from extracted first premolars due to orthodontical means were seeded and incubated on the root surfaces of 7 of the 10 roots in each group. The remaining 3 roots were subjected to the same procedures except seeding of PDL cells on. Following the 2 hour incubation, 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylanimo) carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide (XTT) + Co-enzyme Qo solution was added to each well containing a root slice and incubated for a second time. The medium obtained from each well, was read by using a microplate reader spectrophotometer. The number of metabolically active cells attached to the root surfaces, was calculated from the standart curve. 3 root slices with attached cells and 2 root slices without cells, from each group processed for SEM viewing and photographed at different mgnifications. As a result no significant intergroup differences were found regarding the number of attached cells. But the mean number of the attached cells was highest in the 4th group roots subjected to root planing + citric acid 63demineraliztion + PDGF-BB and the mean number of the attached cells was lowest in the 6th group roots subjected to planing + T-HCL demineralization + PDGF-BB. Root planing is the most important treatment in an attempt to converse the diseased root surfaces to a surface which is biocompatible to PDL cell adherence. PDGF-BB application to citric acid root surfaces demineralized with citric acid could be used to enhance periodontal regeneration. 64