Oral doku örneklerinde sitokrom P450 (CYP450) enzim ekspresyonunun belirlenmesi

Abstract

73 ÖZET ORAL DOKU ÖRNEKLERİNDE SİTOKROM P450 (CYP450) ENZİM EKSPRESYONUNUN BELİRLENMESİ Ekzojenik ve endojenik çok sayıda kimyasalın metabolik aktivasyonu, Sitokrom P450 (CYP) enzimleri tarafından katalizlenir. Bu çalışmada, CYP -2A6, - 2B6, -2C, -2D6, -2E1, -3A3/4 ve -3A5 spesifik primerlerinin kullanıldığı RT-PCR temelli ekspresyon profili altı bireyden alınan yedi adet oral buccal doku örneklerinde analiz edilmiştir. Tek bir molekül içindeki hedef CYP'lerin tamamım amplifiye etmek için gerekli olan primer sekanslarını kapsayan, bilinen kopya sayısındaki bir kompetitör RNA referans olarak kullanılmıştır ve sonuçlar yapısal genlerinin ekspresyonunun yanısıra karaciğer dokusundaki CYP ekspresyonu ile karşdaştırılmıştır. Sonuçlarımız oral dokuda, CYP -2A6, -2C, -2E1 ve -3A5'in devamlı ekspresyonunu göstermiştir. Homozigot delesyonlu genotipte azaltılmış oral kanser riski hakkındaki önceki raporumuza dayanarak, CYP2A6 ekspresyonunun dikkate değer bir öneme sahip olduğunu söyleyebiliriz çünkü bu enzim nitrozarninler tarafından katalitize edilmektedir. Sonuçlarımız CYP'lerin ksenobiyotik aktivasyonundaki rolleriyle de ilişkilendirilerek, kantitatif ekspresyon oranlarıyla tartışılmıştır.

74 ABSTRACT COMPARATIVE CYTOCHROME P450 (CYP450) EXPRESSION IN ORAL BUCCAL TISSUE SAMPLES Metabolic activation of numerous exogenous and endogenous chemicals are catalyzed by Cytochrome P450 enzymes (CYPs). In this study, an RT-PCR based expression profile using CYPs -2A6, -2B6, -2C, -2D6, -2E1, -3A3/4 and -3A5 specific primers were analyzed in a total seven homogenized oral buccal tissue samples from six individuals. An RNA competitor of known copy number covering the primer sequences necessary to amplify the entire object CYPs within a single molecule was used as the reference and results were compared to the CYP expression in liver tissue as well as the expression of a housekeeping gene, GAPDH. Our results demonstrated a consistent expression of the CYPs -2A6, -2C, 2E1 and -3A5. Based on our previous report on the reduced oral cancer risk in homozygote deletion genotype, CYP2A6 expression is of particular importance as this enzyme is characteristic of its catalytic properties to nitrosamines. Our results were discussed in quantitative ratios of the expressed CYP members in relation to their roles in xenobiotic activation.