Brusella hastalarında hücre içi sitokinler ve TH1-TH2 kutuplaşması

Abstract

I.OZET Tüm dünyada yaygın olarak gözlenen ve brusella cinsi bakteriler tarafından meydana getirilen bruselloz; pek çok komplikasyonlara ve nadir de olsa kalıcı sekel ve ölümlere yol açması nedeniyle, önemli bir infeksiyon hastalığı olarak karşımıza çıkmaktadır. Genellikle titreme ile yükselen ateş, kas ağrıları ve terlemeyle seyreder. Brusella bakterileri sıklıkla gastrointestinal sistemle, bazen de deri yoluyla vücuda girer. Vücuda girdikten sonra önce mukozaya tutunan bakteriler ardından submukozada bulunan profesyonel fagositler tarafından alınır. Bölgesel lenf düğümlerinde çoğaldıktan sonra tüm vücuda yayılarak retiküloendotelyal sistem hücrelerine yerleşir. Makrofajlar fagositozdan sonra hücre içi brusella bakterilerini öldürebilme yeteneğine sahiptir. Ancak bakteriler de kendi yaşamlarını idame ettirebilmek için monositik fagositler içinde yaşamak ve çoğalmak zorundadırlar, öldürme yeteneği zayıf organizmalarda bakteri yaşamını sürdürüp hastalık oluşturabilmektedir. Thl veya Th2 cevaplarını tayin etmek için; hücre içi sitokin arama yöntemlerinden hassasiyeti yüksek olan ve tek hücre seviyesinde sitokin sentezi tesbitine imkan sağlayan, flow sitometri ile hücre içi boyama yöntemi kullanıldı. Bu çalışmada brusellozlu olgularda tedavi öncesi ve sonrası hücre içi IFN-y, interlökin-2 (IL-2) ve interlökin-4 (IL-4) değerlerinin saptanması, hastalığın seyri ve tedaviye yanıtın izlenmesi amaçlanmıştır. Çalışmaya, Bruselloz tanısı alan 25 hasta ve hasta yaş gruplarına uygun olarak herhangi bir yakınması olmayan 11 sağlıklı gönüllü alındı. Bir anket formu hazırlanarak çalışma grubundaki hastalara gerek hastalıkla gerekse yapılacak olan işlemlerle ilgili bilgi aktarılıp çalışma için izin alındı. Hastaların öyküleri alındı ve fizik muayeneleri yapıldı. Tüm olgular için tam kan sayımı, rutin biyokimyasal testler ile hücre içi sitokinler çalışıldı. Hücre içi sitokinlerin saptanması için FACScan (Becton Dickinson) flow sitometri cihazı kullanılarak FITC anti- IFN-y, PE anti-IL-2, PE anti-IL-4, CD3 PerCp, CD4 FITC, CD8 PE, Ig Gl rat FITC ve Ig Gl mouse PE (Becton Dickinson) çalışıldı. Yaşla birlikte sitokinlerin artış gösterdiği, brusellozlu olgularda bu korelasyonun bozulduğu, bu olgularda CD3+CD4+ T lenfositlerin kontrol grubuna 1oranla belirgin olarak düştüğü, CD3+CD8+ T lenfositler ve CD3+n7N-y+' nın ise belirgin olarak yükseldiği, Thl/Th2 oranlarında Thl yönüne doğru belirgin bir eğilim olduğu, tedaviye yanıt veren olgularda yanıt vermeyenlere göre CD3+ lenfosit düzeylerinin düşüş gösterdiği ve CD3+IFNy+ düzeylerinin belirgin oranda artış gösterdiği saptanmıştır. Sonuç olarak kronisite eğilimi olan bruselloz olgularında IFN-y değerleri düşük olarak saptanmış olup bu sitokin düzeylerine göre tedaviye IFN-y ya da rekombinan İL- 12 eklenmesinin yararlı olabileceği düşünülmüştür.

II. ABSTRACT INTRACELLULAR CYTOKINES AND POLARIZING OF TH1- TH2 AT PATIENTS WITH BRUCELLOSIS Brucellosis, an important worldwide infectious disease that occurred by Brucellae spp., leads many permanent complications and rare fatality. Generally, it is look on with fever that occurs after chills, muscle pain, and sweating. Brucellae spp. usually enters to body via gastrointestinal system but also enters rarely via skin. Shortly after gaining entry to the body, brucellae are ingested by polymorphonuclear leukocytes, which are attracted to the site of mucosa. Brucellae that aro not killed by PMLs are ingested by macrophages, where they become localized within organs of the reticuloendothelial system. Macrophages are capable of killing Brucellae spp. after phagocytosed. However, Brucella species have to survive and replicate for living within phagocytic cells of the host. Bacteria can live and occur disease in hosts that have weak killing capability. For determining Thl and Th2 responses, flow cytometria, the sensivity of very high for determining intracellular cytokine and had ability to determine of cytokine at one cell level, is used by intracellular staining. In this study, we aimed to determine intracellular IFN-y, Interleukin-2 (IL-2) and Interleukin -4 (IL-4) levels at before and after treatment of brucellosis patients, and progress and response to the treatment of these cytokines. In this study, 25 patients diagnosed as Brucellosis and 1 1 healthy volunteers as appropriate for patients' age levels were included. A questionnaire prepared and all subjects were acquainted for their disease and all procedures and allowed for study. Anamneses were received, physical examinations were done, and complete blood counts, routine biochemical tests, and intracellular cytokines levels were studied for all subjects. Intracellular cytokines levels were studied with FACScan (Becton Dickinson) flow cytometria dovice using with FITC anti- IFN-y,.PE anti-IL- 2, PE anti-IL-4, CD3 PerCp, CD4 FITC, CD8 PE, Ig Gl rat FITC and Ig Gl mouse PE (Becton Dickinson).It was determined that the cytokines levels showed increase according to the age, this correlation was braked down at brucellosis. CD3+CD4+ T lymphocytes levels were more clearly decreased but CD3+CD8+ T lymphocytes and CD3+IFN-y+ levels were increase at patients according to the controls. In addition, the ratios of Thl/Th2 were clear tending to Thl direction, the CD3+ lymphocyte levels were clearly decreased, and finally CD3+IFN-y+ levels were clearly increased at patients responsive to management according to unresponsive. As a result, the IFN-y levels were determined as low at patients incline to chronicity, and it is suggested that adding IFN-y or recombinant IL-12 to the treatment will be beneficial. 4