The role of FLT3 in hepatocellular carcinogenesis

Abstract

Karaciğer kanseri, dünyada en yaygın görülen ve ölüm oranı çok yüksek olan birhastalıktır. Bu durumunun başlıca sebebi de, kanseri tanısında ve tedavisindeetkili olacak genlerin çok iyi tanımlanmamış olmasından kaynaklanır. Karaciğerkanserinin fibrozdan baslayan farklı aşamalarında rolü bulunan genelerintanımlanması, kanseri tanısında, seyirinin tespitinde ve tedavisinde önemligelişmeler sağlayacaktır. Bu nedenle yeni bir belirleyici gen bulmayıamaçlamaktayız. Grubumuzun daha önceki çalışmasında, oval hücre belirleyicisiolan FLT3 geninin karaciğer yenilenmesi sırasında bir rolü olduğu gösterilmiştir.FLT3'ün kan kök hücrelerinde bulunduğu ve kan kanserlerinde ifade veaktivitelerinde artış olduğu bilinmektedir. İmunohistokimyasal analizlerimiz ileFLT3'ün sirotik karaciğerler de gözlemlediğimiz için, bu genenin karaciğeryaralanmalarının yanısıra karaciğer kanserinde de rolü olduğunu düşünmekteyiz.Bu amaçla, 14 karaciğer kanseri hücre hattında (HepG2, Hep3B, Hep40, Huh7,PLC/PRF/5, Mahlavu, Focus, Sk-Hep-1, Snu182, Snu387, Snu398, Snu423,Snu449, Snu475), FLT3'ün mRNA ve protein düzeyinde, diğer erişkin kök hücreve kanser kök hücresi belirleyicilerinin de mRNA düzeyinde ifadelerini araştırdık.Daha sonra FLT3 ifadesinin çeşitliliğine göre 4 hücre hattı (Snu182, Snu398,Huh7 ve Hep40) belirleyip, bunlarda FLT3 inhibitörü kullanarak, geninfonksiyonunu inceledik. Inhibitör, protenin hücre içindeki yerini değiştirmeklebirlikte, bu hücrelerin in vitro ortamda yayılmalarında da değişikliğe sebepolmuştur. Bunun yanı sıra çıplak farelerdeki zenograft deneyleri, FLT3 ifadesigösteren hücrelerin inhibitöre maruz kaldıklarında tümör oluşturma etkilerindebüyük ölçüde azalma görülmüştür. Bu sonuçlar bize FLT3'in karaciğerkanserlerinde önemli rol oynadığını göstermekte ve FLT3'ün karaciğeryenilenmesi ve kanseri arasında bir bağ kurabileceğini düşündürmektedir.

Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most prevalent cancer types and ithas a high mortality rate. Its high incidence is a consequence of lack ofbiomarkers that could track the progression of the disease. Identification of amarker, which involves in different stages of cancer progression, through fibrosisto HCC, would be a good candidate for diagnosis, prediction of prognosis andtargeted therapies. Therefore we decided to identify a novel marker for HCCs, toovercome these consequences. Previously our group has shown that oval cellmarker FLT3, a known hematopoetic stem cell marker and which is known to beconstitutively active in many of the leukemias, has a role in liver regeneration.Also our immunohistochemical analysis of cirrhotic liver tissues have shown thatFLT3 is expressed in liver injury. Therefore, we decided to analyze the role ofFLT3 in hepatocellular carcinogenesis. Expression analysis of FLT3 on mRNAand protein level and the expression analysis of adult stem cell, cancer stem cell,and epithelial and mesenchymal lineage markers on mRNA level in 14 HCC celllines (HepG2, Hep3B, Hep40, Huh7, PLC/PRF/5, Mahlavu, Focus, Sk-Hep-1,Snu182, Snu387, Snu398, Snu423, Snu449, Snu475) was performed. Four ofthese cell lines (Snu182, Snu398, Huh7 and Hep40) were chosen due to theirdifferent expression levels of FLT3 and the functional role of FLT3 in HCCs wasassessed by blocking its activity by a small molecule inhibitor K-252aNocardiopsis sp.. Functional studies had shown that upon inhibitor treatment,subcellular localization of the protein was changed and its invasion ability in vitrowas impaired. Also nude mice xenografts had shown that upon inhibitor treatmenttumor forming ability of FLT3 expressing cells were highly diminished. Thereforewe suggest that FLT3 has a role in hepatocellular carcinogenesis and it might beanother link between liver regeneration and hepatocellular carcinogenesis