In-vivo yöntemlere alternatif olarak ın-vitro yöntemle inaktif newcastle hastalığı aşılarında etkinlik tayini

Abstract

Bu tez çalışmasında, inaktif Newcastle hastalığı aşılarının etkinliğinin belirlenmesinde, hayvan kullanımını azaltan ya da ortadan kaldıran in-vitro ELISA metodunun uygulanabilirliği araştırılmıştır. Bu amaçla, Newcastle hastalığına karşı kanatlı hayvanlarda kullanılan tek ya da çok komponentli 9 inaktif Newcastle hastalığı aşısı ile yalancı reaksiyonları değerlendirmek için Newcastle hastalığı virusu içermeyen 2 aşı kullanıldı. Aşıların etkinlik düzeyleri in-vivo ve in-vitro yöntemlerle değerlendirildi. In-vivo olarak `Spesific Pathogen Free` (SPF) civcivlerin aşılanması sonrası oluşan antikor yanıtın serolojik olarak değerlendirildiği hemaglutinasyon inhibisyon testi ve SPF civcivlerde koruma düzeylerinin belirlendiği çalenç/eprüvasyon çalışmaları gerçekleştirildi. In-vitro olarak ise İnaktif Newcastle hastalığı aşıları için geliştirilmiş olan ve aşıda bulunan hemaglütinin ve nöraminidaz antijenlerini saptamaya yönelik sandviç ELISA testi kullanıldı. ELISA testinden elde edilen optik dansite sonuçları kullanılarak Combistats İstatistiksel Analiz Yazılım Programı ile paralel doğru analiz metoduyla aşıların relatif potens değerleri hesaplandı.Hemaglutinasyon inhibisyon test sonuçları 23,3 ile 26,1 aralığında, immunizasyon-çalenç sonuçları 56 ile 136 PD50 aralığında ve ELISA testi ile relatif potens değerleri 6,02 ile 98,23 antijen ünitesi aralığında bulundu. ELISA testi ile immunizasyon-çalenç testi arasında (r2=0,93) ve hemaglutinasyon inhibisyon testi ile immunizasyon-çalenç testi arasında (r2=0,95) anlamlı korelasyon saptandı. ELISA testinin duyarlılığı %89, özgüllüğü ise %100 olarak hesaplandı ve tekrarlanabilirlik, tekrar üretilebilirlik değerleri açısından kabul edilebilir sınırlar içinde seyrettiği görüldü. Bu sonuçlara göre, laboratuvar şartlarında ELISA metodunun uygulanabilirliği, standart prosedüre olan uyumu ve aynı örnekler üzerinde benzer sonuçlar verebilme yeteneği gösterilmiş oldu.

In this thesis study, the applicability of an in-vitro ELISA method which reduces or eliminates the need for animal trials in establishing the efficacy of inactive Newcastle Disease Vaccines was investigated.For this purpose, a single or multi-component 9 inactivated Newcastle disease vaccines used in poultry and two vaccines without Newcastle disease virus were used to assess pseudo-reactions. The efficacy levels of vaccines were evaluated by in-vivo and in-vitro methods.As in-vivo tests, vaccines were applied to the `Spesific Pathogen Free` (SPF) chicks and antibody response was determined serologically (hemagglutination inhibiton test), and protection levels were determined with challenge trials. As in-vitro, Antigen amount in vaccines were calculated with a sandwich ELISA test based on the determination of hemagglutinin and neuraminidase levels developed for inactive Newcastle vaccines. Relative potency values of vaccines were calculated by using the parallel line analysis method with Combistats Statistical Analysis Software Program by using optical density results obtained from ELISA test.Hemagglutination inhibiton test results were found to be in between 23,3 and 26,1; immunization/challenge results ranged between 56 and 136 PD50 and ELISA test results were between 6,02 and 98,23 antigen units. Meaningful correlation was found between the ELISA test and immunization/challenge test (r2=0,93) as well as hemagglutination inhibiton and immunization/challenge test (r2=0,95). Sensitivity and specificity were found to be %89, %100 respectively and in terms of reproducibility and repeatability they were within acceptable range. According to these results, the ELISA procedure's applicability, compatibility with standard procedure as well as its ability to provide similar results on the same samples were demonstrated.