Investigation of cancer development on human newborn foreskin cells and human melanocytes via exosomes containing Rab27a and Met oncogene isolated from human malignant melanoma cancer cell lines

Abstract

Ekzozomlar endositik merkezden köken alan 40-100 nm büyüklüğündeki küçük veziküllerdir. Verici hücreden alıcı hücreye taşınması amacıyla içlerinde DNA parçaları, mRNA parçaları, mikroRNA ve proteinleri taşırlar. Mezankimal kök hücreler, immün sistem hücreleri, kanser hücreleri vb. ekzozom salınımı yaparlar. Çalışmalar kanser kök hücrelerinden salınan şekillenen ekzozomların tömör oluşumuna özgü çevresel düzenlemeyi sağlayacak bir çok yeniden programlama faktörlerini oluşturduklarını göstermektedir. Referans niteliğindeki çalışmaların başında melanoma kanser hücrelerinden tomurcuklanan ekzozomların c-Met ve Rab27a gibi melanomaya spesifik işaretleyici genlerin ve proteinlerin iletimini sağladıklarına dair bilimsel yayın gelmektedir. Serum ekzozomlarında artan c-Met ekspresyonu hastalığın gelişmesinde önemli bir etken olarak düşünülmektedir. Rab27a ise ekzozomların hücrelerden salınımında önemli bir gen olarak belirlenmiştir. Deri kanseri hücrelerinde azalan Rab27a ekspresyonunun ekzozom salınımı sekteye uğrattığı yapılan çalışmalar ile gösterilmiştir. Bu projede Rab27a ve c-Met ekspresyonlarının deri kanseri hücreleri ve dolayısıyla ekzozomlarında arttırılıp ve azaltılıp, sağlıklı insan yenidoğan sünnet derisi kök hücreleri ve insan fibroblastlarına uygulandıklarında nasıl bir etkilerinin olduğunun anlaşılması amaçlanmıştır. Bu süreçte hücrelere gen transfeksiyonları, akış sitometrisi ile transfeksiyonların etkilerinin bakılması, Annexin-V ile kontrollü hücre ölümü analizi, hücre göçünün miktarı, ELISA testleri ve gen anlatımı düzeylerinin analizi yapılmıştır. Deri kanseri hücreleri ekzozomlarının insan fibroblast görünümlü kök hücreler ve insan deri yetişkin hücreleri üzerinde kanser hücreline benzeyen davranışları arttırdığı ve azalttığı c-Met ve Rab27a ekspresyonlarının artışı ve azaltılışı üzerinden bu çalışma ile gösterilmiştir. Melanoma kanser hücrelerinden salınan ekzozomların içeriğinin belirlenmesi ve moleküler uygulamalar üzerinden gelecekteki çalışmalar için incelenmesi çok önemli bir terapi yöntemi olarak düşünülmektedir.

Exosomes are small membrane derived vesicles originating from endocytic core with 40100 nm. Exosomes transmit DNA constituents, mRNAs, microRNAs and proteins that are relocated from a donor cells to a receiver cell. Many divergent cells comprising mesenchymal cells, immune cells and cancer cells discharge exosomes. Studies show that cancer cell exosomes create the entry and reprogramming of essentials connected to tumor environment. A reference study established that melanoma-derived exosomes convey diverse proteins such as c-Met and Rab27a, which indicate a melanoma mark. Increased Met expressions in serum exosomes have thought to be a predictor of disease progression. Meanwhile, Rab27a has identified to be important in exosome discharge. Decreased expressions of Rab27a in human melanoma cells determined to diminish exosome release. This project aims to examine the effects of downregulation and upregulation of Rab27a and c-Met in human melanocyte and recently identified stem cells isolated from human newborn foreskin tissue by utilizing the isolated exosomes from malignant melanoma cell lineages. Throughout the analysis of cancer-like formation; different protocols covering gene transfections, flow cytometry analysis of the transfection efficiency, Annexin-V apoptosis assays, cell migration assays, tube formation assays, ELISA assays and gene expression profiling were performed. According to the results, exosomes derived from cancer cells conveyed information to healthy fibroblastic like stem cells from human newborn prepuce and healthy melanocytes/keratinocyte and induce cellular reaction with Met and Rab27a overexpression and silencing may be beneficial approaches for future treatment possibilities. The developing molecular contextual of melanoma exosomes and their implications for improved management of melanoma patients can be an astonishing therapeutic methodology for future actions.