Ras aktif hücrelerde kaspazların apoptoz üzerine etkileri

Abstract

RAS AKT F HÜCRELERDE KASPAZLARINAPOPTOZ ÜZER NE ETK LERÖZETBu tez kapsamında, Cis-platin ile stimüle edilen insan-U2OS (osteosarkoma)hücrelerindeki morfolojik ve biyokimyasal değişimler, kaspaz-3 ve kaspaz-9enzimlerinin apoptotik mekanizma üzerine etkileri incelenmiştir. Bunun yanı sıra,çeşitli ekstrasellüler proteinler (fibronektin, kollajen ve trombospondin-1) ileaktive edilen integrin reseptörlerinin U2OS hücre apoptoz mekanizmasındaki rolüçok yönlü olarak araştırılmıştır.Mitokondriyal aktiviteye yönelik yapılan sitotoksik incelemeler, Cis-platinin IC50değerinin 4 µM olduğunu göstermiştir. Sitotoksik etkisi bulunmayankonsantrasyon aralığı kullanılarak yapılan morfolojik ve nüklear boyamaçalışmaları ise, apoptotik hücre zar bütünlüğünün bozulduğunu, hücre zarındatomurcuklanmaların meydana geldiğini, nüklear apoptotik değişimlerin ve DNAparçalanmasının başladığını göstermiştir. Kaspaz-9'un kaspaz-3'e oranla Cis-platin ile stimüle edilen U2OS apoptoz mekanizmasında anlamlı bir etkiye sahipolduğu flurosan-işaretleme yöntemi ile bulunmuştur. Farklı integrinlerinaktivasyonuna bağlı olarak da apoptotik osteosarkoma hücre oranında değişimlergözlenmiştir. Özellikle fibronektine (α4β1, α3β1, αVβ3) bağlanan hücreler deapoptoz oranının, diğer proteinlere oranla daha düşük olduğu tespit edilmiştir.Cis-platin ile DNA hasarı oluşturularak U2OS hücrelerinde apoptozmekanizmasının moleküler düzeyde araştırılması ve metastazda önemli olanintegrin reseptörlerinin nasıl etkilendiğinin tespit edilmesi çeşitli tedaviyöntemlerinin geliştirilmesine olanak sağlayacağı düşünülmektedir.Anahtar Kelimeler : kaspaz, apoptoz, kaspaz inhibitörleri, cis-platin

THE EFFECTS OF CASPASES ON APOPTOSIS IN RAS-ACTIVATEDCELLSABSTRACTIn this thesis, the changes of morphological and biochemical features and theeffects of kaspaz-3 and kaspaz-9 enzymes on apoptotik mechanism of treatedhuman-U2OS (osteosarcoma) cells were investigated. Beside, the role of integrinreceptors activated by varies of extracellular proteins (fibronectin, collagen,trombospondin-1) on U2OS apoptotic mechanism was also studied in variesaspects.IC50 value of Cis-platin was found 4 µM by cytotoxic studies based onmitocondrial activities. The morphological and nuclear staining studies by usingnon-toxic concentrations range were indicated that the cell membrane ruptures,membrane blebbing, nuclear apoptotic changes and DNA fragmentation werestarted. Kaspaz-9 was found more effective on the apoptotic mechanism of Cis-platin stimulated U2OS cells than kaspaz-3. The variation was observed on theratio of apoptotic U2OS cells with dependent on type of integrin activated.Especially, the apoptotic ratio of fibronectin attached cells was lower than otherproteins used.The investigation of apoptotic mechanism of cis-platin induced U2OS cells andhow the integrins effected during metastas are determined important fordeveloping new medical treatments.Key Words : caspase, apoptosis, inhibitors of caspase, cis-platin