Yeni triazolotiyadiazin türevlerinin sentezi ve biyolojik etki çalışmaları

Abstract

Gliomalar oldukça yüksek öldürme oranıyla merkezi sinir sistemi tümörleri içerisinde insan yaşamı için ciddi bir tehlike oluşturmaktadır. Kanser oluşumuna ve gelişimine yol açan mekanizmalardan birisinin de hücrelerde araşidonik asit metabolizmasında görev alan siklooksijenaz yolağı olduğu düşünülmektedir. Birçok çalışmada, araşidonik asit metabolizmasının baskılanmasının hücrelerde kanser oluşumunu ve gelişimini engellediği gösterilmiştir. Bu çalışmada, ilk olarak indometazin ve tiyokarbohidrazitin çözücüsüz ortamda gerçekleşen reaksiyonu sonucu 4-amino-5-[(5-metoksi-2-metil-1-(4-klorobenzoil)-1H-indol-3-il)metil]-4H-1,2,4-triazol-3-tiyon elde edilmiştir. Daha sonra bu bileşiğin 2-bromoasetofenon türevleri ile reaksiyonu sonucu yeni 3-[5-metoksi-2-metil-1-(4-klorobenzoil)-1H-indol-3-il)metil]-6-(4-sübstitüefenil)-7H-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiyadiazin türevleri (1-8) sentezlenmiştir. Elde edilen bileşiklerin yapıları IR, 1H-NMR, 13C-NMR, kütle spektroskopik yöntemleri ve elemental analiz ile aydınlatılmıştır.Elde edilen bileşiklerin T98 insan glioma hücre dizisi üzerinde hücre çoğalmasına etkileri MTT yöntemi ile araştırılmıştır. Ayrıca etkili bileşiklerin apoptoza olası etkileri akım sitometrisi ile; COX-2, kaspaz 3, 8 ve 9, sitokrom c mRNA relatif miktar ölçümleri RT-PCR yöntemi ile yapılmıştır. T98 Hücreleri 24 saat boyunca maddelerin 1, 5, 10, 25, 50 ve 100 µM dozları ile muamele edilmiştir. 3-[5-Metoksi-2-metil-1-(4-klorobenzoil)-1H-indol-3-il)metil]-6-(4-metilfenil)-7H-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiyadiazin (8) bileşiğinin 50 ve 100 µM dozlarında hücre yaşam oranlarını sırasıyla %25 ve %40 oranında azalttığı tespit edilmiştir. 8 nolu bileşiğin aynı dozlarında ölçülen apoptoz uyarma yüzdeleri ise kontrole göre (%5) sırasıyla 50 µM doz için % 11 ve 100 µM için % 12 olarak tespit edilmiştir. Ayrıca RT-PCR analizlerinde, 8 nolu bileşiğin kontrol grubuna göre COX-2 mRNA miktarını anlamlı ölçüde azalttığı ve diğer parametrelerde (Kaspaz 3, 8, 9, sitokrom c) anlamlı bir değişikliğe neden olmadığı tespit edilmiştir. Bu çalışma, 8 nolu maddenin COX-2 yolağını baskılayarak doza bağımlı antikanser etki gösterdiğini ortaya koymuştur. Anahtar Kelimeler: Triazol, triazolotiyadiazin, T98 glioma, antikanser, apoptoz, COX-2.

Gliomas pose a severe danger with a huge death rate among central nervous system tumors. One of the mechanism causing cancer occurrence and development is considered to be cyclooxygenase pathway, which takes an important role in arachidonic acid metabolism. In many studies, it has been revealed that blocking arachidonic acid metabolism prevents the occurence and development of cancer in cells.In this study initially, 4-amino-5-[(5-methoxy-2-methyl-1-(4-chlorobenzoyl)-1H-indol-3-yl)methyl]-4H-1,2,4-triazol-3-thione was synthesized via the solvent-free reaction of indomethacin with thiocarbohydrazide. Then the ring closure reaction of this compound with 2-bromoacetophenone derivatives afforded new 3-[5-methoxy-2-methyl-1-(4-chlorobenzoyl)-1H-indole-3-yl)methyl]-6-(4-substituedphenyl)-7H-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-thiadiazine derivatives (1-8). The structures of these compounds were elucidated by IR, 1H-NMR, 13C-NMR, mass spectroscopic methods and elemental analysis.The effects of the obtained compounds on the proliferation of T98 human glioma cell line were investigated with MTT assay. Besides, possible apoptotic activities and the measurement of COX-2, caspase 3, 8 and 9, cytochrome c mRNA relative quantity of the effective compounds were performed with flow cytometry and RT-PCR method, respectively. T98 cells were treated with 1, 5, 10, 25, 50 and 100 µM doses of the compounds for 24 hours. It was determined that 3-[5-methoxy-2-methyl-1-(4-chlorobenzoyl)-1H-indole-3-yl)methyl]-6-(4-methylphenyl)-7H-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-thiadiazine (8) reduced cells' survival rates at 50 and 100 µM doses with 25% and 40% reasonable values, respectively. The apoptosis stimulating percentages of compound 8 in comparison with the control group (5%) at 50 and 100 µM doses were calculated as 11% and 12%, respectively. Besides, in RT-PCR analysis, it was determined that compound 8 reduced COX-2 mRNA levels significantly when compared with the control group, whereas it did not cause any significant change in other parameters (Caspase 3, 8, 9, cytochrome c). This study revealed that compound 8 showed dose-dependent anticancer activity via the inhibition of COX-2 pathway. Key Words: Triazole, triazolothiadiazine, T98 glioma, anticancer, apoptosis, COX-2.