Eritropoietik hücre farklılaşması süresince gözlenen membran abnormalitelerinin SDS_PAGE yöntemi kullanılarak belirlenmesi

Abstract

ÖZET Eritrosit membranının sodyum dodesilsülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) analizi birbirinden farklı protein tiplerinin varlığını ortaya çıkartmış ve bunların büyük bir çoğunluğu tanımlanmıştır. Bugüne kadar eritrosit deformabilitesi, özellikle bir çok hemoglobinopati tipinde çalışılmıştır. Buna rağmen eritrosit membran proteinlerinin oksidasyonuna bağlı olarak ortaya çıkan membran bozuklukları ve bunların hemoglobinopatilerde gözlenen şiddetli anemi durumu ile olan klinik bağlantıları üzerine az sayıda çalışma yapılmıştır. Eritrosit membran proteinlerinin SDS-PAGE yöntemi ile elektroforetik olarak incelenmesi, bu hastalıkların klinik olarak tanımlanması ve teşhislerinde büyük önem taşımaktadır. Çalışmanın ilk aşamasında hemin ile eritroid farklılaşma için indüklenen K562 hücre hattında, insan eritrolökemia hücre hattı, farklılaşan eritroid hücrelerin membranlarında bulunan proteinlerin tanımlanabilmesi amaçlanmıştır. İkinci aşamada ise; eritroid farklılaşmanın yanı sıra, hücrelerin fenilhidrazin ile muamele edilmesi a globin zincir oksidasyonunu indüklendiği ve ? talasemi majör benzeri eritroid hücrelerin yaratılması amaçlanmış ve a globin zincir birikimi neticesinde ortaya çıkan serbest radikallerin spesifik olarak hangi tip membran proteinlerini etkilediğine bakılmıştır. K562 hücrelerinin hemin ile indüklenmesi sonrasında eritroid farklılaşmanın 2.,3.,4. ve 5. günlerinde fenilhidrazin ile muamele edilerek membran proteinleri izole edilmiştir. Farklıklılaşmanın belirtilen günlerinde fenilhidrazin ile muamele edilmemiş kontrol grubu hücrelerinden de membran proteinleri izole edilmiştir. Bu her iki gruptaki hücrelerin ve farklı günlerdeki hücrelerin membran proteinleri birbirleri ile karşılaştırıldığında bir farklılık gözlenememiştir. Sağlıklı bireylerden almış olduğumuz eritrositlerin fenilhidrazin ile muamele edilmesi sonucunda ise globin zincirinde ve protein 4.9 banımda değişimler gözlenmiştir. Hücre membran proteinlerini incelemek amacı ile kullandığımız SDS-PAGE yönteminin, çeşitli hemoglobinopatilerdeki membran protein anormalliklerini göstererek bu hastalıkların patogenezine ışık tutabilecek bir potansiyele sahip olduğu görüşündeyiz.

ÖZET Eritrosit membranının sodyum dodesilsülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) analizi birbirinden farklı protein tiplerinin varlığını ortaya çıkartmış ve bunların büyük bir çoğunluğu tanımlanmıştır. Bugüne kadar eritrosit deformabilitesi, özellikle bir çok hemoglobinopati tipinde çalışılmıştır. Buna rağmen eritrosit membran proteinlerinin oksidasyonuna bağlı olarak ortaya çıkan membran bozuklukları ve bunların hemoglobinopatilerde gözlenen şiddetli anemi durumu ile olan klinik bağlantıları üzerine az sayıda çalışma yapılmıştır. Eritrosit membran proteinlerinin SDS-PAGE yöntemi ile elektroforetik olarak incelenmesi, bu hastalıkların klinik olarak tanımlanması ve teşhislerinde büyük önem taşımaktadır. Çalışmanın ilk aşamasında hemin ile eritroid farklılaşma için indüklenen K562 hücre hattında, insan eritrolökemia hücre hattı, farklılaşan eritroid hücrelerin membranlarında bulunan proteinlerin tanımlanabilmesi amaçlanmıştır. İkinci aşamada ise; eritroid farklılaşmanın yanı sıra, hücrelerin fenilhidrazin ile muamele edilmesi a globin zincir oksidasyonunu indüklendiği ve ? talasemi majör benzeri eritroid hücrelerin yaratılması amaçlanmış ve a globin zincir birikimi neticesinde ortaya çıkan serbest radikallerin spesifik olarak hangi tip membran proteinlerini etkilediğine bakılmıştır. K562 hücrelerinin hemin ile indüklenmesi sonrasında eritroid farklılaşmanın 2.,3.,4. ve 5. günlerinde fenilhidrazin ile muamele edilerek membran proteinleri izole edilmiştir. Farklıklılaşmanın belirtilen günlerinde fenilhidrazin ile muamele edilmemiş kontrol grubu hücrelerinden de membran proteinleri izole edilmiştir. Bu her iki gruptaki hücrelerin ve farklı günlerdeki hücrelerin membran proteinleri birbirleri ile karşılaştırıldığında bir farklılık gözlenememiştir. Sağlıklı bireylerden almış olduğumuz eritrositlerin fenilhidrazin ile muamele edilmesi sonucunda ise globin zincirinde ve protein 4.9 banımda değişimler gözlenmiştir. Hücre membran proteinlerini incelemek amacı ile kullandığımız SDS-PAGE yönteminin, çeşitli hemoglobinopatilerdeki membran protein anormalliklerini göstererek bu hastalıkların patogenezine ışık tutabilecek bir potansiyele sahip olduğu görüşündeyiz.