Normal ve deksametazon verilen sıçan plasentasında hücre siklusu proteinlerinden siklin-E, PCNA ve p27` nin dağılımı.

Abstract

Prenatal devrede fetüsün gelişmesinde, özellikle hücresel olgunlaşmave differensiyasyon olaylarında, glukokortikoidler oldukça önemlidir.Günümüzde glukokortikoidlerin antiproliferatif etkileriyle de IUGR' ne nedenolduğu bilinmektedir. Ancak bu etkilerini G1 fazı üzerinden yapıpyapmadıkları hakkında henüz bir çalışma yoktur.Bu çalışmada, bir glukokortikoid olan deksametazonun plasentalgelişmede G1 fazı proteinleri olan siklin-E, PCNA ve inhibitör özellikli p27üzerindeki etkilerini immunohistokimyasal ve TEM teknikleriyle, ayrıca birapoptoz belirteci olan TUNEL metodu ile belirlemeye çalıştık. Bunun içingebe sıçanlardan kontrol (8 dişi) ve deney (8 dişi) olmak üzere iki grupoluşturduk.Sıçanlarda deksametazonla IUGR oluşturulmasında gebeliğin13.gününde deney grubundan her hayvana 100?g, 14?19. günler arasında200?g/kg deksametazon asetat, kontrol hayvanlarına ise 13?19. günlerarasında serum fizyolojik subkutan olarak verildi. Gebeliğin 20. gününde eteranestezisi altında kontrol ve deney hayvanlarından glukokortikoid ölçümü içinkan örnekleri alındı. Bunu takiben, hayvanlar diseke edilerek toplananplasentaları ve fetüsleri tartıldı. Kontrol ve deney hayvanı plasentalarındanışık mikroskopi için alınan örnekler Holland fiksatifinde, transmisyon elektronmikroskopu için alınan örnekler %4' lük gluteraldehitte ve %1' lik OsO4' tetesbit edildi ve rutin histolojik takip işlemlerinden geçirildi. Hazırlananbloklardan alınan kesitlerde siklin-E, PCNA ve p27 antikorlarınınimmünboyanma yoğunluklarına, ayrıca pozitif hücre sıklığı HSCOREdeğerlerine bakıldı, TUNEL pozitif hücreler belirlendi. TEM' de ince yapıdeğişiklikleri belirlenmeye çalışıldı.Deksametazonun sıçan plasentasında ve embriyosunda önemlilikdüzeyinde ağırlık kaybına neden olduğu görüldü (p<0,005). PCNAimmünboyanma yoğunlukları labirent kısmında ve bağlantı zonunundaazalmıştı. Trofoblast dev hücrelerinde PCNA boyanması azdı. PCNA' nınaksine bütün hücrelerde p27 boyanma yoğunluğu artmıştı. Ancak siklin-Eimmünboyanması gerçekleştirilemedi. TEM' de de apoptotik hücrelergözlendi.Sonuçta, bir glukokortikoid olan deksametazonun sıçan plasentasındaG1 fazı proteinlerinden PCNA' nın dağılımını azalttığı, p27 dağılımını iseartırdığı ve bu yolla hücre siklusu üzerinde antiproliferatif bir etkidebulunduğu sonucuna varıldı.Anahtar kelimeler: IUGR,

During the growth of fetus in prenatal life glucocorticoids are veryimportant, especially in cell maturation and differentiation events. Today it isknown that glucocorticoids lead to IUGR by antiproliferative effects. However,there is not any study that determined whether glucocorticoids do theseeffects during G1 phase.In this project, we aimed to define the effects of dexamethasone -aglucocorticoid- on G1 phase proteins such as cyclin-E, PCNA and p27 duringplacental development by immunohistochemical, TUNEL techniques andtransmission electron microscopy. We composed two groups of pregnantrats; control (8 female) and experiment (8 female).In order to compose IUGR on rats via dexamethasone, every pregnantrat in experiment group was injected 100?g of dexamethasone acetatesubcutaneously on the 13th day of pregnancy and 200?g between 14th-19thdays of gestation. Between the 13th-19th days of gestation vehicle wasapplied to control rats. On the 20th day of gestation blood samples weretaken from rats under ether anesthesia in order to measure plasmaglucocorticoid levels. Then dissected placentas and fetuses were weighed.Placentas which were obtained for light microscopy were fixed in Hollandfixative. Electron microscopic samples were fixed in 4% glutaraldehyde andfollowing in 1% OsO4. Additionally rutin histological tissue preparingprocesses were applied to the samples.On sections obtained from prepared blocks immunostaining densitiesof cyclin-E, PCNA, p27 antibodies and positive stained cell frequency -HSCORE levels- were examined. TUNEL positive cells were determined.Besides ultrastructural changes were tried to be determined by electronmicroscope.It was determined that dexamethasone leads to statistically significantweight loss on rat placenta and fetus (p<0,005). Immunostaining density ofPCNA decreased in labyrinth and junctional zone. There was a decrease inPCNA staining of trophoblast giant cells. In contrary to PCNA, p27 stainingincreased in all of the cells. However cyclin-E immunostaining could notcarried out. Also apoptotic cells were observed by TEM.In conclusion, dexamethasone has decreased the expression of PCNAbut increased p27 expression on rat placenta. Thus it creates anantiproliferative effect on cell cycle.Key words: IUGR, placenta, rat, cyclin-E, PCNA, p27,immunohistochemistry, TUNEL, TEM