MHV antikorunun tayininde kullanılacak indirekt ELISA tekniği için tavuk Marek hastalığı virusunun (MHV) katı faza immobilize edilmesi

Abstract

54 VI. ÖZET Bu çalışmada indirekt ELISA yöntemini yerleştirmek için bir ön ça lışma olarak tavuklarda tümör yapan MHV antijeni katı faza immobilize edildi, sonuçları gözlemlendi. Bunun için, önce normal tavuk serumundan tavuk gama globulini Na`SO, prespitasyonu ile elde edildi. Tavuk gama globulini FCA ile karış tırılarak 3 kez tavşana enjekte edildi ve tavşanın immunize olması sağ landı. Tavşan antiserumundan tavşan antitavuk gama globulini Na`SO, pre spitasyonu ile elde edildi. Tavşan antitavuk gama globulini ile HRP'dan periodat metoduna göre konjugat hazırlandı. Aktive edilmiş PVC mikro ELISA plakalarına 1/100 sulandırılmış MHV antijeni immobilize edildi. Marek pozitif ve/Marek negatif serumlarının 1/50' den 1/3200' e kadar seri veya sulandırmaları yapıldı. Test serumları ise 1/50 'den 1/400 'e kadar sulan dırıldı. Plakadaki kuyulara serum dilüsyonlarının ilavesi ve 60 dakikalık inkübasyonundan sonra yıkama işlemi yapılarak 1/2000 sulandırılmış konju gat ilave edildi. 60 dakika 37°C'da inkübe edildikten sonra yıkama işlemi yapılıp, substrat olarak 0PD ilave edildi. 37 C'da 30 dakika inkübe edi lip 2M H`S0, ile reaksiyon durduruldu ve 492 nm'de O.D'leri okundu. Test sonucunda elde edilen MHV antikor miktarını gösteren absor- bans değerleri istatistiksel olarak incelendiğinde pozitif kontrol serumu ile negatif kontrol serumunun arasındaki farkın bütün dilüsyonlarda an lamlı olduğu gözlendi. 4 adet tavuk (aşılı) test serumundan elde edilen absorbans değerleri Marek pozitif kontrol değerlerine yakın bulunurken, 3 adet civcivin değerleri Marek negatif kontrol değerlerine yakın bulun muştur.

- 55 - i THE IMMOBILIZATION OF MAREK'S DISEASE VIRUS (MDV) TO SOLID PHASE TO BE USED IN THE INDIRECT ELISA TECHNIQUE FOR DETERMINATION OF MDV ANTIBODY VH. SUMMARY In this study, a tumor inducing MHV antigen specific for chickens was immobilized to solid phase to be used in the indirect ELISA method. The fowl gamma globulin was isolated by Na^SO, precipitation from normal fowl serum. This fowl gamma gloulin mixed with FCA, was injected to rabbits three times for immunization. Rabbit antifowl gamma globulin was isolated from immunized rabbit serum by Na~S0, precipitation. The rabbit antifowl gamma globulin - horseradish peroxidase conjugate was prepared by periodate method. 1/100 diluted MHV antigen was immobilized to activated PVC micro-ELISA plates. From 1/50 to 1/3200 dilutions of Marek positive and/Marek negative control sera were applied to the wells of micro-ELISA plates. The test sera were diluted from 1/50 to 1/400 before application to micro-ELISA plates. The diluted sera were incubated for 60 minutes, washed and 1/2000 dilution of the conjugate was added to each well. After incubation for 60 minutes at 37 C, the wells were washed and 0PD was added as the substrate. After incubation for 30 min. at 37 C, the reaction was stopped by 2 M H`S0,. The absorptions were read at 492 nm. The absorption values which show indirectly the MHV antibody con centration were analyzed statistically. The differences between Marek positive and Marek negative sera in all of the dilutions were found to be highly significant. 4 chicken sera and 3 chick sera were used as test sera. MHV antibody values close to Marek positive sera values were found for chicken sera whereas chick sera gave results close to Marek negative sera.