Tavşanlarda marek hastalığı virusu (MHV) antikorunun eldesi ve ELISA yöntemi için katı faza immobilizasyonu

Abstract

- 49 - ÖZET Bu çalışmada tavuklarda MHV antikorunun kantitatif tespiti için ELISA yönteminde kullanılacak plakalar tavşandan MHV antikoru elde edilerek katı faza immobilize edilmiştir. Tavşan, HPRS-16 susu (MHV antijeni) `Freund complete adjuvant (FCA)` ile 3 kez enjekte edilerek immunize edildi. Tavşan an- ti serumuna Na^SO, presipitasyonu uygulanarak tavşan anti MHV gama globulini saf laştırıldı. Tavşan anti MHV gama globulini 100 yi kaplama solüsyonunda 5 mg içerecek şekilde hazırlana rak aktive edilmiş PVC plakalarmdaki kuyulara 37 C'de 3 saat bekletilerek immobilize edildi. 3 defa fosfat şalin tamponu- Tween-20 (PBS-T) ile kuyular yıkandıktan sonra PBS-T ile 1/100 dilue edilmiş MHV antijeninden 100 'er yi herbir kuyuya ilave edilerek 37°C'de 1 saat bekletildi. Yine 3 kez PBS-T ile yıkandı. Marek (+) kontrol serumu 1/50'den 1/1600'e, Marek (-) serumu 1/50'den 1/1400'e kadar ve test serumları 1/50 ile 1/100 sulandırılarak kuyulara 100'er yi konulup 37°C'de 1 sa at bekletildi. 3 kez PBS-T ile yıkama işlemi yapıldı. Normal tavuk serumundan Na`S0, presipitasyonuyla elde edilen tavuk gama globulini FCA ile birlikte 3 kez tavşana enjekte edildi. Immunize tavşanın serumuna Na`S0, prespitasyonu uygulanarak gama globulin fraksiyonu elde edildi. Tavşan anti tavuk gama globulini ile `horse radish peroksidaz` dan periodat metoduna göre konjugat ilave edildi. PBS ile 1/2000 sulandırılmış konjugatlar 100'er yi herbir kuyuya ilave edilip 37 C'de 1 saat bekletildi. 3 kez PBS-T ile yıkama işlemi yapıldıktan sonra 100'er yi 0-f enilendiamin substrat olarak ilave edilip 37°C'de 30 dakika bekletilip reaksiyon 2 MH^O^ ile durdurul-- 50 - du ve 492 nm'de OD okundu. Test sonucunda elde edilen MHV antikorlarını gösteren absorbans değerleri istatistiksel olarak incelendi* Pozitif kontrol serumu ile negatif kontrol serumları arasında bütün dilüsyonlarda farkın anlamlı olduğu görüldü. 1/200 dilusyona kadarda dilusyonlar arası anlamlı bulundu. Tavuk ve civciv test serumları 1/50 ve 1/100 dilüsyonlarda incelendiğinde MHV antikor miktarı tavuklarda Marek pozitif kontrol serumuna ya kın civcivlerde ise Marek negatif kontrol serumuna yakın de ğerler verdi.

- 51 ISOLATION OF THE ANTIBODY AGAINST MAREK DISEASE VİRÜS (MDV) FROM RABBITS AND ITS IMMOBILIZATION TO SOLID PHASE FOR THE ELISA TECHNIQUE SUMMARY Antibody against Marek disease virus (MDV) was isolated from immunized rabbits with HPRS-16 strain (MDV - antigen) and it was immobilized to PVC plates to be used in the ELISA technique. The rabbit antisera was presipitated with Na`SO, for the gamma globulin isolation MDV-antigen was added to the immobilized wells of the plates. Then Marek (+) and Marek (-) control sera with different dilutions (1/50 to 1/1600 for Marek ( + ) and 1/50 to 1/400 for Marek (-) and Fowl sera and chick sera with 1/50 and 1/100 dilutions were added to the wells. Fowl anti sera obtained from immunized rabbits was isolated by Na`S0, precipitation. Rabbit anti - fowl gamma globulin was added with horse radish peroxidase as a conjugate. O-phenylene diamine was used as the substrate. The 0D at 492 nm was determined. In all of the dilutions there were statistically significant differences between (+) and (-) control sera. Up to 1/200 dilution, there were also significant differences between the dilutions. The 1/50 and 1/100 dilutions of fowl test sera gave similar results as Marek positive control sera. On the other hand chick test sera values were close to (-) Marek control sera values.