In vitro bir model olarak endotel hücre kültürü

Abstract

- 40 - V. ÖZET Kan damarlarının içini kaplayan endotel hücreleri trombosit ve diğer kan hücrelerinin yapışamadığı bir yüzey oluşturur ve hemostazda çok önemli rol alır. Bu hücreler be sinlerin ve diğer solütlerin kandan dokulara geçişini ayar lar ve vasküler tonu sentezlediği vasoaktif maddelerle regüle eder. Endotel hücrelerinin bozukluğu trombus oluşumuna ve ateroskleroza neden olur. Endotel hücrelerinin kültürde yaşatılabilmesi ve ta- nımalnması bu hücrelerin metabolik ve fonksiyonel özellikle rinin araştırılabileceği bir model oluşturur. Bizim çalışmamızda, göbek kordonlarından kollejenaz ile ayrılan endotel hücreler % 30 insan serumu içeren medium 199'da kültüre edildiler. Hücreler 7-10 günde küçük endotel tabakalarından etrafa yayılarak, poligonal hücrelerden kon- fluent bir tabaka oluşturdular. Hücrelerin endotel hücresi olduğu, kültür ortamında vWF'nun varlığı ile ispatlandı. Kültür vasatlarında PGI` ve ACE düzeyleri belirlendi ve PGI 'nin hücre sayısına bağlı olarak artış gösterdiği sap tandı. 3 H timidin kullanılarak, ECGF ve D'in endotel hücrele ri üzerindeki proliferatif etkisi karşılaştırıldı ve ECGF'ün D'ye nazaran çoğalmayı artırdığı saptandı.- 41 - Jelatin ve kollejen kaplı kaplardaki hücrelerin timi- din katılımından ise kollejen üzerindeki hücrelerin jelatin üzerindekilere nazaran daha hızlı prolifere oldukları belir lendi.

- 42 - SUMMARY Endothelial cells lining all blood vessel provide a nonthrombogenic surface to which platelets and other blood cells fail to adhere and play a vital role in hemostasis. They mediate the passage of nutrients and other solutes from blood to tissues. Endothelial cells may also regulate vascular tone by synthesizing the vasoactive agents prosta cyclin and angiotensin converting enzyme. Abnormalities of these cells have been associated with such diseases as throm bosis and atherosclerosis. The ability to culture and maintain identifiable endo thelial cells provides the opportunity to set up an vitro model system to study and analyze metabolic and functional properties of these cells. In our study, human endothelial cells obtained by collagenase treatment of human umbilical cord veins were cultured using Medium 199 supplemented with 30% human serum. Small clusters of cells initially spread on collagen or gelatin coated flasks to form confluent monolayers of poly gonal cells by 7-10 days. Cells in primary and subcultures were identified as endothelium by the presence of von Willebrand Factor in culture medium. Levels - of prostasyclin and angiotensin converting enzyme were measured in cell culture supernatants at certain- 43 - intervals. It is found that PGI` levels increase with increasing cell number, The effect of ECGF and D on endothelial cells in vitro 3 were compared by liquid scintillation measurements of (H ) thymidine incorporation in subcultures of single primary cultures. The data indicate that ECGF stimulates cell proliferation compared to D. Comparison of thymidine incorporation of cells on collagen and gelatin coated flasks suggest that collagen cultured cells exibit higer proliferation than cells cultured on gelatin.