Hepatit B virüsünün rekombinant DNA teknikleri ile saptanması

Abstract

VI. ÖZET Bu çalışmada klinik ve serolojik olarak viral hepatit tanısı konulmuş kişilerde moleküler hibritleme yöntemi ile HBV DNA saptanmıştır. Uygulamada, bu kişilerden alman kan serum örnekleri dört değişik yöntemle hazırlanmışlar ve naylon membrana geçirilerek, radyoaktif izotoplarla işaretli problarla moleküler hibritiemeye tabii tutulmuşlardır. Çalışmada HBV genomuna komplementer sentetik oligonükleotid ve de HBV genomu taşıyan PHBV 130 plazmit prob olarak kullanılmıştır. Bu problar, işaretlenip, sefadeks kolondan geçirilmişlerdir. Elde edilen sonuçlar 35S ve 32P ile işaretlenmiş probların virüs varlığım duyarlı bir şekilde saptanmasında yararlı olduklarını göstermiştir. 64

VH. SUMMARY THE DETECTION OF HEPATITES B VIRUSES BY RECOMBINANT DNA TECHNOLOGY In this study HBV DNA was detected with the molecular hybridization technique in individuals that were clinically and serologically diagnosed to have viral hepatitis. Blood serum samples taken from these patients were prepared with four different methods then transferred to nylon membranes and hybridized with radiolabelled probes. Synthetic oligonucleotides complementary to HBV genome and HBV carrying pHBV 130 plasmid were used as probes after labelling and passing through sephadex column. Results showed probes labelled with 35S and 32P could be used to detect sensitively the presence of viruses. 65