N-benzil-N-etilanilin ve N-benzil-p-toluidin bileşiklerinin in vitro mikrozomal metabolizmalar

Abstract

83 5. ÖZET Bu çalışmanın ilk bölümünde, ilaç metabolizma reaksiyonlarına ait genel bilgiler, in vitro ilaç metabolizma çalışmalarında kullanılan teknikler, aminlerin metabolizması hakkında literatür araştırmaları yapılmıştır. Daha önceki çalışmalar, çeşitli N-benzil substitue sekonder anilinlerin in vitro mikrozomal metabolizması sonucu karşılık gelen amid metabolitlerine dönüştüğünü göstermiştir. Bazı türevlerde ise amid metabolitleri saptanmamıştır. Bu çalışmada, amid türevi metabolitleri tespit edilen iki sekonder amin olan N-benzilanilin (NBA) ve N-benzil-p- toluidin (NBPT) bileşiklerinin azot atomları üzerinde etil gruplarının ilavesiyle kazanılan iki tersiyer amin N-benzil- N-etilanilin (NBNEA) ve N-benzil-N-etil-p-toluidin (NBNEPT) üzerinde in> vitro mikrozomal metabolizma çalışmaları yaparak bu bileşiklerin her iki alkil grubu üzerinden amid84 metabolitlerini verip vermeyeceğini, dealkilasyon ve N- oksidasyon reaksiyonlarını araştrrmayı amaçladık, Substratlar ve olası metabolitleri sentez edilerek yapıları aydınlatıldıktan sonra, İTK ve HPLC kromatograf ik teknikleri ile ayırımları sağlandı. Inkübasyonlar, NADPH ilavesi ile sıçan hepatik mikroEornlarını kullanarak düzenlendi. Substrat ve metabolitleri diklorometan ilavesi ile ekstraksiyonları ve metabolik ekstraktların ITK ve HPLC ile analizleri yapıldı. Deneylerden alınan sonuçlar her iki substratin da amid metabolitlerine dönüşmediğini, etil ve benzil grubundan dealkilasyon reaksiyonlarının cereyan ettiğini gösterdi. Her iki substratin metabolizması sonucu ITK ve HPLC analizleri ile görülen diğer metabolitlerin fenol ve alkol metabolitleri olduğu düşünülmektedir. Elde edilen bu bulgular, * aromatik aminlerden amid oluşumunda nitron metabolitlerinin (oksaziridin üzerinden amidlere kimyasal dönüşümle) rolü olduğu bulgusunu * önceki çalışmalarda amidlerin tayin edilemeyişlerinin bir nedeni olan C-N bağlarının stabil olmadığı durumlarda karbinolamin ara ürünlerinin, amid fonksiyonuna okside olmaksızın dealkilasyon metabolitlerine parçalandığı hipotezini desteklemektedir.

85 6. SUMMARY In the first part of this study, metabolic pathways of drug metabolism reactions and in vitro techniques used in drug metabolism and metabolism of amines in organic molecules were reviewed. Previous studies showed that amides were metabolites arising from certain N-benzyl substituted anilines following in vitro microsomal, metabolism. However, some analogus compounds did not produce amides under identical metabolic conditions. In the present study, we wished to study the in vitro microsomal metabolism of two tertiary anilines ie N-benzyl- N-ethylaniline (NBNEA) and N-benzyl-N-ethyl-p-toluidine (NBNEPT) in order to determine whether these compounds produce amide metabolites (benzoyl or acetyl derivatives) together with N-dealkylation and N-oxidation products.86 The preparation and characterisation of these tertiary anilines and their corresponding potential metabolites were undertaken. These compounds were then separated using chromatographic te'chniques ie TLC and HPLC. Incubations were performed using rat microsomal preparations fortified with NADPH. The substrates and their potential metabolites were extracted into dichloromethane, examined by TLC and HPLC. The metabolic process of particular interest was the formation of amides from NBNEA and NBNEPT. The results from these experiments indicated that both tertiary anilines (NBNEA and NBNEPT) did not produce amide metabolites (neither acetyl nor benzoyl derivatives) but these substrates were dealkylated to corresponding secondary amines (debenzylation and deethylation). The unknown metabolites observed following metabolic reactions with both substrates are proposed to be phenol and alcohol metabolites. These findings support the concept that : * nitrones are essential intermediate metabolites for the detection of amides from secondary aromatic amines (chemical rearrangement to amide via an oxaziridine intermediate) * carbinolamines produced by NBNEA and NBNEPT are not stable enough to allow further oxidation to amides and therefore these intermediates are broken down to the dealkylation products instead of producing amides via further oxidation.