Mikroenjeksiyon tekniği kullanılarak transgenik fare eldesinin incelenmesi

Abstract

7.ÖZET Bu çalışmada transgenik fare elde etmek için mikroenjeksiyon tekniği kullanılarak fareye gen aktarılmıştır. Çalışılan üç adet plazmit (pXGH5,pTKGH ve pOGH) elde edildikten sonra uygun restriksiyon enzimlerle kesilerek istenilen gen bölgesi gene-clean yöntemiyle agaroz gelden saflaştınlmıştır.Saflaştınlan bu genler %1'lik agaroz gelde incelenmiştir. pXGH5 plazmidinden elde edilen b.GH+mMT-1 gen bölgeleri(4.0 kb) kesilerek fareye mikroenjeksiyon yoluyla verümiştir.2.5 ay sonra fare kuyrukları ^İmarak DNA'larr elde ed3miştir.Bot irtot hibridizasyorh yöntemi kullanılarak farelerde genin integre olup olmadığının kontrolü yapılmıştır. Transgenik fareler;genetik hastalıklara model oluşturmaları ve moleküler biyolojinin temellerini oluşturmada katkıda bulunmalarından ötürü büyük öneme sahiptirler. 66

SUMMARY The purpose of this work was to get transgenic mice by using microinjection technique. hGH gene and releated promoters were isolated.The plasmids, pXGH5,pTKGH and pOGH all contain hGH. The promoters of pXGH5 and pTKGH are mMT-1 and pTKGH-HSV respectively.pOGH has no promoter.Following isolation of the promoter and gene sequences,they were digested and purified from agarose gel by gene-clean method. hGH+mMT-1 gene sequences (4.0 kb) were isolated from pXGH5, digested with Eco Rl and were transferred to the fertilize mouse eggs by micromjection.At the and of 2.5 months DNA was extracted from mouse tails.And were tested by dot blot hibridization technique to control the gene integration. The transgenic mice have importance in molecular biological experiments and they also were used as a model system for the investigation of genetic diseases. 6S