Siprofloksasin, İmipenem ve Seftazidim`in tek başına ve Klaritromisin ile kombinasyonlarının kistik fibrozlu hastalardan elde edilmiş pseudomonas aeruginosa kökenlerinin ürettiği biyofilm üzerindeki etkilerinin in vitro koşullarda araştırılması

Abstract

ÖZET Bu çalışmada, kistik fibrozlu hastalardan izole edilen sekiz klinik köken ve Pseudomonas aeruginosa ATTC 27853'ün; - biyofilm üretip üretmedikleri ve üretilen biyofilmin yapısının elektron mikroskobu ile incelenmesi, - siprofloksasin, imipenem ve seftazidimin tek başına ve klaritromisin ile kombinasyonları halinde biyofilm üreten ve üretmeyen suşlar üzerindeki antibakteriyel aktiviteleri, - biyofilmin içerdiği al j inat miktarı ve denenen antipsödomonas antibiyotiklerin tek başlarına ve klaritromisin ile kombinasyonlarının al j inat miktarı üzerine etkisi, - denenen antipsödomonas antibiyotiklerin tek başına ve klaritromisin ile kombinasyonlarının al j inat içeren ortama difüzyon derecesinin karşılaştırılması amaçlanmıştır. Biyofilm yapımı için gerekli koşullar altında bekletilen bakterilerin biyofilm üretip üretmedikleri elektron mikroskobu ile incelenmiş ve denenen dokuz kökenden birinin biyofilm oluşturduğu saptanmıştır. Kökenlerin siprofloksasin, imipenem, seftazidim ve klaritromisine duyarlılıkları sıvı besiyerinde makrodilüsyon yöntemi ile araştırılmış ve antibiyotiklerin MİK değerlerinin sırasıyla 0.78-3.125 ug/ml, 0.25-4 fig/ml, 0.5-8 ug/ml ve 160- >320 ug/ml arasında değiştiği saptanmıştır.Klaritromisin ile kombinasyon halinde kullanılan siprofloksasin, imipenem ve seftazidim biyofilm üreten bakteri üzerinde tek başına kullanıldıkları duruma kıyasla daha yüksek antibakteriyel aktivite göstermişlerdir. Antipsödomonas antibiyotiklerin klaritromisin ile kombinasyon halinde kullanılması ile bakterilerin al j inat üretimi, bu antibiyotiklerin tek başlarına kullanıldıkları duruma oranla daha azalmıştır. Değişik oranlarda (%0.5 ve %1) aljinat içeren katı besiyerine antibiyotiklerin difüzyon derecesi inhibisyon zon çapları gözönüne alınarak araştırıldığında antipsödomonas antibiyotiklerin aljinatlı ağarda difüzyon derecesi, kontrol ile karşılaştırıldığında tek başlarına kullanıldığı durumda azalırken klaritromisin ile kombine edildiklerinde artmıştır. Sonuç olarak, klaritromisin ile antipsödomonas antibiyotiklerin kombine kullanımının in vivo çalışmalarla da desteklenmek koşulu ile biyofilm oluşturan Pseudomonas aeruginosa' ya bağlı kronik infeksiyonlarda yararlı olacaklarını söyleyebiliriz.

SUMMARY In this study, eight clinical strains of Pseudomonas aeruginosa isolated from cystic fibrosis patients and one standard strain were used to perform the followings; screening the strains for biofilm production and observing the structure of biofilm by electron microscope, observing the antibacterial activity of ciprofloxacin, imipenem, and seftazidim alone and in combination with clarithromycin against biofilm producing and not biofilm producing bacteria, - observing the quantity of alginate in biofilm and effect of antipseudomonal antibiotics alone and in combination with clarithromycin on the quantity of alginate, observing the diffusion degree of antipseudomonal antibiotics alone and in combination with clarithromycin - by considering the zone diameters of inhibition - into the medium with different alginate concentrations. The bacteria kept under suitable conditions for biofilm production were examined by electron microscope and one of the strains was found to produce biofilm. In vitro activity of ciprofloxacin, imipenem, seftazidim and clarithromycin were tested by macrodilution technique andMIC values were determined in the ranges of 0.78-3.125 ug/ml, 0.25-4 ug/ml, 0.5-8 fig/ml and 160->320 (jg/ml respectively. Ciprofloxacin, imipenem and seftazidim in combination with clarithromycin have showed better antibacterial activity against biofilm producing bacterium with that of when they were used alone. The reduction in quantity of alginate have been more significant when antipseudomonal antibiotics were used in combination with that of when they were used alone. The diffusion degree of antipseudomonal antibiotics - by considering the zone diameters of inhibition - into the medium with different alginate concentrations (0.5% and 1%) has decreased when compared with control. The combination of antipseudomonal antibiotics with clarithromycin has increased the diffusion degrees of antipseudomonal antibiotics into the alginate containing medium. Consequently, clarithromycin in combination with antipseudomonal antibiotics - also with supportive in vivo studies - can be useful for the treatment of chronic infections where the causative agent is biofilm producing Pseudomonas aeruginosa.