Choline ve choline içeren fosfolipidlerin tayini için yeni bir enzim elektrodu geliştirilmesi

Abstract

m ÖZET Bu çalışmada, kolin oksidaz enziminin Pt elektrot yüzeyindeki polivinilferrosenyum perklorat matriksi içerisinde immobilize edilmesiyle, sulu çözeltide koline duyarlı yeni bir enzim elektrot hazırlanması amaçlanmıştır. Bu amaçla öncelikle kolin oksidaz enziminin serbest haldeki kinetik özellikleri incelenmiş ve optimum pH 7,4 ve optimum sıcaklık 40°C olarak saptanmıştır. Serbest enzimin Michaelis-Menten sabitinin (Km) 2,26 mM kolin ve aktivasyon enerjisinin de (Ea) 9,15 kkal/mol olduğu bulunmuştur. Enzim elektrodunun hazırlanmasında 0,1 M TBAP(Tetrabutilamonyum Perklorat) içeren metilen klorürdeki PVF (Polivinilferrosen)'in elektroçöktürülmesiyle ile hazırlanan PVF+CI04' (Polivinilferrosenyum Perklorat) modifiye elektrodu kullanılmıştır. PVF+CI04` modifiye elektroduna iyon değişim yoluyla kolin oksidaz enzimi tutuklanarak kolin oksidaz enzim elektrodu hazırlanmıştır. Bu şekilde oluşturulan enzim elektrodu için çeşitli deneysel parametreler incelenerek optimum şartlar belirlenmiştir. PVF+CI(V filmi içinde immobilize edilmiş kolin oksidaz için görünür Michaelis-Menten sabiti (Kmg) 2,32 mM kolin, aktivasyon enerjisi (Ea) 9,3 kkal/mol, optimum pH 7,4 ve optimum sıcaklık 40°C olarak belirlenmiştir. Bu enzim elektrodunun doğrusal çalışma aralığı 1,2 mM'a kadar kolin derişimi olup cevap süresi 60-70 saniyedir. ANAHTAR KELİMELER: Kolin, Polivinilferrosen, Enzim elektrot.

IV ABSTRACT The aim of this study is the preparation of a new enzyme electrode in order to analyse the choline in the aqueous solution by means of choline oxidase enzyme immobilized in polyvinylferrocenium perchlorate matrix on the surface of Pt electrode. For this purpose, the kinetics of choline oxidase were investigated at the first step and the pH and temperature optima were determined as 7,4 and 40°C, respectively. It was found that Michaelis-Menten constant (Km) of free enzyme is 2,26 mM choline and activation energy (Ea) is9, 1 5 kcal/mol. The construction of enzyme electrode, polyvinylferrocenium perchlorate (PVF+ CIO4`) modified electrode, has been prepared by the electroprecipitation of polyvinylferrocene on the Pt electrode in methylene chloride/0,1 M TBAP solution. On the other hand, enzyme electrode has been prepared by using choline oxidaze enzyme immobilized PVF+CI04` modified electrode, by ion exchange. For the enzyme electrode prepared with this method, optimal conditions were determined by the examination of experimental parameters. It was found that apparent Michaelis- Menten constant (Kmg) is 2,32 mM choline, optimum temperature 40°C, optimum pH 7,4 and activation energy (Ea) 9,3 kcal/mol for the immobilized choline oxidaze in PVF+CI04` film. The linearity of this enzyme electrode has been found about 1,2 mM choline concentration and the response time of it was 60-70 s. KEY WORDS: Choline, Poly(vinylferrocene), Enzyme electrode.