Siprofloksasin dirençli MRSA suşlarında gyrA ve parC gen mutasyonlarının moleküller tespiti

Abstract

ivÖZET(Siprofloksasin Dirençli MRSA Suşlarında gyrA ve parC Gen MutasyonlarınınMoleküler Tespiti)Metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) birçok klinikte hastane kaynaklıinfeksiyon etkeni olarak izole edilmektedir ve son yıllarda kinolon grubuantibiyotiklere karşı giderek artan oranda direnç kazanmaktadır.Bu çalışmada ilk olarak, Isparta Süleyman Demirel Üniversitesi Tıp FakültesiHastane'sinin değişik klinik örneklerinden temin edilen 22 adet MRSA ve 2 adetmetisiline duyarlı S. aureus (MSSA) suşunun siprofloksasin ve gatifloksasineduyarlılığı disk difüzyon ve E-testi yöntemleri ile belirlendi. Disk difüzyon testinegöre, 22 MRSA suşunun hepsi siprofloksasine, 16'sının da gatifloksasine dirençliolduğu tespit edildi. E-testi sonuçlarına göre ise MRSA suşlarının hepsisiprofloksasine dirençli iken, suşlardan yalnızca 1'i gatifloksasine dirençli bulundu.Kontrol olarak kullanılan 2 MSSA suşunun beklendiği gibi siprofloksasin vegatifloksasin antibiyotiklerine hassas olduğu tespit edildi.Çalışmanın ikinci aşamasında her bir bakteri suşunun gyrA ve parC genlerininkinolon direnç belirleyici bölge (KDBB)'leri polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ileçoğaltıldı ve bu bölgelerinde mutasyon olup olmadığı dizi analizi ile belirlendi.Siprofloksasin minimum inhibisyon konsantrasyon (MİK) değerleri 6 - >32 µg/mLaralıklarında tespit edilen MRSA suşlarının hepsinde gyrA geninde Ser84Leu veparC geninde ise Ser80Phe mutasyonları tespit edildi. MSSA suşlarının gyrA veparC genlerinin KDBB'lerinde bir mutasyon görülmedi.ANAHTAR KELİMELER: MRSA, PZR, kinolon direnci

vABSTRACT(Molecular Detection of gyrA and parC Gene Mutations in Ciprofloxacin ResistantMRSA Strains)Methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) have been isolated as anosocomial infection agent in clinics of many hospitals. Recently MRSA has beenincreasingly getting resistance against quinolones.In the first part of this study, 22 MRSA and 2 methicillin sensitive S. aureus(MSSA) strains obtained from Isparta Süleyman Demirel University Hospital weretested to determine their susceptibility to ciprofloxacin and gatifloxacin by using diskdiffusion and E-test methods. All of the 22 MRSA strains were resistant tociprofloxacin while 16 MRSA strains were resistant to gatifloxacin in disk diffusionmethod. Based on the results from E-test, all of the MRSA strains were resistant tociprofloxacin and only one MRSA strain was resistant to gatifloxacin. As expected, 2MSSA strains were found to be susceptible to both ciprofloxacin and gatifloxacinantibiotics.In the second part of the study, the quinolone resistance determining regions(QRDRs) of the gyrA and parC genes of MRSA strains were amplified using PCRand sequenced to determine the presence or absence of mutations in the QRDR. AllMRSA strains with the minimum inhibitory concentration (MIC) values ofciprofloxacin ranged between 6 - >32 µg/mL had Ser84Leu substitution in gyrA andone Ser80Phe substitution in parC. As being susceptible to both antibiotics, 2 MSSAstrains did not have any mutation in the QRDR of the gyrA and parC genes.KEY WORDS: MRSA, PCR, quinolone resistance