Yeni bir kinetik seruloplazmin ölçüm yöntemi geliştirilmesi

Abstract

Seruloplazmin; ferroksidaz enzim aktivitesi gösteren, temel görevi kanda bakırıntaşınması olan, bunun yanı sıra antioksidan ve akut faz proteini olmak gibi işlevleribulunan çok fonksiyonlu globüler bir proteindir. Seruloplazmin proteini aynı zamandaferroksidaz aktivitesi ile demir metabolizmasında da önemli bir rol üstlenmektedir.Genetik bir mutasyondan kaynaklanan Wilson hastalığı ile Menkes sendromu veedinilmiş hastalıklar olan karaciğer yetmezliği, infektif ve inflamatuvar hastalıklar gibioksidasyon seviyesinin arttığı durumlarda düzeyi değişir.Seruloplazmin, sahip olduğu ferroksidaz enzim aktivitesi ile vücuttaki endojensubstratı olarak kabul edilen ferröz demir iyonlarını ferrik demir iyonları formunadönüştürür. Bu dönüşümün kinetik olarak izlenmesi ile ferroksidaz enziminin aktivitesitayin edilir. Serum içerisinde bulunan ferroksidaz enzimi, substrat olarak reaksiyonortamına eklenen ferröz demir iyonlarını, ferrik demir iyonlarına oksitler, oluşan ferrikdemir iyonları, hem şelatör hem de kromojen olarak fonksiyon gösterenasetohidroksamik asit ile bağlanır ve bu bağlanma sırasında ferroksidaz enzimaktivitesiyle doğru orantılı olarak gözlenen renk değişimi kinetik olarak izlenir.Yöntemde gerçekleştirdiğimiz optimizasyon çalışmaları, ferroksidaz enzimaktivitesi için referans olarak kabul edilen; substrat ve kromojen olarak O-dianizidinkullanılan referans yöntem ile karşılaştırma yapılarak desteklendi. Bu iki yöntemarasında anlamlı bir korelasyon (r: 0,981, p<0,001) bulundu.Seruloplazmin proteininin tayin edildiği immünotürbidimetrik yöntemde, buproteinin sadece miktarı belirlenirken, teze konu olan ferroksidaz aktivitesi ölçümyönteminde, miktarı hakkında fikir sahibi olmanın yanında fonksiyonu hakkında dakantitatif bir veri elde edildi. Aynı zamanda bu yöntem ile düşük maliyetli, hızlı sonuçalınabilen ve tam otomatik sistemlere kolayca uyarlanabilen bir test elde edilmiş oldu.

Ceruloplasmin is a multi-function globular protein that shows ferroxidase enzymeactivity, and its main task is the transportation of the copper within the blood.Additionally, ceruloplasmin has functions such as being an antioxidant and acute phaseprotein. With the help of its ferroxidase activity it also plays an important role in ironmetabolism. In case of the following diseases the ceruloplasmin protein level ischanged; the Wilson's disease which is caused by a genetic mutation, liver failureswhich is caused by the Menkes syndrome, and infectious and inflammatory diseaseswhich leads an increase in the oxidation levels.By means of its ferroxidase enzyme activity, ceruloplasmin converts the ferrous ironions, which are accepted as the endogenous substrates in the body, into the ferric ironions. Ferroxidase enzyme activity is determined by kinetic investigation of thistransformation. The ferroxidase enzyme present in serum oxidizes the ferrous iron ions,which are added as substrate to the reaction medium, into the ferric iron ions. Theresulting ferric iron ions are binded to the acetohydroxamic acid which functions asboth the chelator and the chromogen. The color change which is directly proportional tothe ferroxidase enzyme activity, is kinetically investigated during the binding process.Optimization of the method is performed and results are supported by comparing themethod to the reference method that is used for the ferroxidase enzyme activity; themethod which uses the O-dianizidin as substrate and chromogen. A meaningfulcorrelation is found (r: 0,981, p<0,001) between two methods.In the immunoturbodimetric method in which the ceruloplasmin protein is determined,only the amount of the protein is obtained. However, in the ferroxidase activitymeasurement method which is also the subject of the thesis, a quantitive data for boththe amount and function of the ceruloplasmin protein is obtained. At the same time withthis method a low cost and fast test which can be easily adapted to the fully automatedsystems is obtained.