İnsan kronik miyeloid eritrolösemi hücre soyunda muskarnik reseptör aracılı mitojenle aktive olan protein kinaz aktivasyonunda epidermal büyüme faktör reseptörünün rolü

Abstract

Amaç: Muskarinik reseptörler (M1-M5) G protein kenetli reseptör süper ailesinin üyesidir ve farklı fizyolojik olayların düzenlenmesinde rol oynar. Son çalışmalarda muskarinik reseptörlerin hematopoietik hücrelerde hücresel faaliyetlere aracılık ettiği önerilmektedir. Bu çalışmada insan eritrolösemi hücrelerinde Epidermal Growth Faktör reseptörlerinin (EGFR), muskarinik reseptör aracılı mitojenle aktive olan protein kinaz aktivasyonunda, rolünü belirleyebilmek için karbakol ve/veya EGF varlığında ERK, pERK, EGFR, ekspresyon düzeylerinin belirlenmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda ATTC'den alınmış insan eritrolösemi K562 hücreleri kullanılmıştır. K562 hücreleri 24 saat serumsuz ortamda çoğaltıldıktan sonra kolinerjik agonist karbakol (100M, 1mM) veya 16 nM epidermal büyüme faktörü (EGF) 30 dakika uyarılmıştır. Ayrıca EGFR kinaz inhibitörü PD 153035 ile 5 dakika sonra CCh veya EGF ile 30 dakika muamele edilmiştir. Karbakol veya EGF'nin transkripsiyonel cevabını belirlemek üzre c-fos ekspresyonu belirlenmiştir. Ayrıca kolinerjik reseptörler aracılı ERK aktivasyonunda PI3K'ın rolünü belirlemek üzre 20M PI3K inhibitörü wortmanin ile 10 dakika inkübe edilmiştir.Bulgular ve Sonuç: Muskarinik reseptör aracılı mitojenle aktive olan protein kinaz aktivasyonunda epidermal büyüme faktör reseptörünün rolünü belirlemek üzre, protein ekspresyon deneyleri yapılmıştır. İnsan eritrolösemi hücrelerinde EGFR, pERK, ERK, c-fos ekspresyonu gösterilmiştir. Ancak kolinerjik agonist karbakol ve/veya 4DAMP, EGF'nin ve inhibitörlerin ERK, pERK, c-fos, EGFR protein ekspresyon düzeylerinde değişime neden olmamıştır. Anahtar kelimeler: Kolinerjik reseptör, karbakol, ERK, c-fos, K562 hücre.

Objective: Muscarinic receptors (M1-M5) are a member of the G protein coupled receptor superfamily. These are involved in the regulation of many different physiological processes. In Recent studies suggested that muscarinic receptors in hematopoietic cells have been mediated cellular activities. In this study, to evaluate the role of human epidermal growth factor receptor (EGFR) on muscarinic receptor mediated mitogen activated kinase in erythroleukemia cells , effects of CCh and /or EGF are used , have been detected protein expression of ERK,pERK, c-fos and EGFR.Material and method: In our study, human erythroleukemia K562 cells were obtained from ATCC. K562 cells were incubated with carbachol (100µM,1μM) or EGF (16nM) for different times. In some experiments, the cells were pretreated with pharmacological inhibitors for different times. Cells were lysed with TE buffer. Protein concentration was measured Lowry method. Expression of EGFR, pERK, ERK and c-fos were determined with western blotting.Results and conclusion: To evaluate the role of human epidermal growth factor receptor (EGFR) on muscarinic receptor mediated mitogen activated kinase in erythroleukemia cells ,protein expression experiment have been made. In this study shown that expression of EGFR, ERK and c-fos were detected on K562 cells. But cholinergic activation of the mAChR's in human erythroleukemia cell have not changed expression of EGFR, ERK and c-fos protein levels.Keywords: Cholinergic receptor, carbachol, ERK, c-fos, K562 cell