Termofilik aspergillus niger`den pektin liyaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Bu tez çalışmasında amaç yeni termofilik mikroorganizmalardan pektin liyaz enzimini üretmek ve üretilen bu enzimi saflaştırıp karakterize etmektir.Bu amaçla termofilik Aspergillus niger Ocak 4 fungusu farklı besi ortamlarında yetiştirilmiştir. En yüksek enzim elde edilen besi ortamı belirlenmiştir. Termofilik fungustan pektin liyaz enzimi üretimli için, amonyum sülfat ile kısmi saflaştırılma yapılmış ve jel filtrasyon ve iyon değişim kromotografisi ile de saflaştırma işlemlerine kademeli olarak devam edilmiştir.Saflaştırılan enzimin optimum pH ve sıcaklık çalışmaları yapılmıştır. Böylece saflaştırılan enzim için en uygun pH ve sıcaklık değerleri elde edilmiştir. SDS-PAGE yöntemi ile de enzimin molekül ağırlığı tayini yapılmıştır.Saflaştırılan pektin liyaz enzimi için optimum pH 8.0; optimum sıcaklık ve süre sırasıyla 40 ºC, 60 dk olarak belirlenmiştir. Bu enzim için jel filtrasyon kromotografisi ve iyon değişim kromotografisi ile sırasıyla 4,2 kat ve 76,5 kat saflaştırma katsayısı elde edilmiştir.

The aim of this study is produce pectin lyase enzyme from thermophilic microorganisms and purify and characterize this enzyme.For this purpose thermophilic Aspergillus niger Ocak 4 fungi was growth different submerged conditions. Submerged conditions obtaining maximum enzyme was determined. Pectin lyase enzyme was produced from thermophilic microorganisms, partial purification with ammonia sulphate was done. Purification studies were also resumed with gel filtration and ion-exchange chromatography.Optimum pH and temperature studies of purified enzyme was done. Thereby optimum pH and temperature values were obtained for purified enzyme. Molecular weight determination of purified enzyme was done with SDS-PAGE.For purified pectin lyase enzyme, optimum pH 8.0; optimum temperature and time 40 ºC, 60 min were determined. For this enzyme 4,2 and 76,5 purification fold were obtained with ion-exchange chromatography and gel filtration chromatography respectively.