Brucella enfeksiyonunda serolojik yanıtın brucella ham antijenleri kullanılarak hazırlanan Elisa ve western blotting yöntemleri ile tanımlanması

Abstract

ÖZET Brucella Enfeksiyonunda Serolojik Yanıtın Brucella Ham Anty enleri Kullanılarak Hazırlanan ELÎSA ve Western Blot Yöntemleri ile Tanımlanması Brusellozis gelişmekte olan birçok ülkenin önemli bir sağlık sorunudur. Brucella bakterilerinin geç ve güç üremeleri tanılarında serolojik testlerin önemini arttırmıştır. Akut ve kronik brucellozda inkomplet IgG ve IgM antikorlarım saptamada ELISA testi önemli bir yer tutmaktadır ve Western Blot doğrulama testi olarak kullanılmaktadır. Çalışmamızda Brucella ham antijeni kullanılarak akut ve kronik hasta gruplarının ELISA IgG ve IgM'leri çalışıldı ve elde edilen sonuçlar Western blot testi ile doğrulandı. Akut ve kronik brucelloz tanısı almış toplam 50 hasta incelemeye alındı. Akut brucellozlu hastalar için ELISA IgM duyarlılık ve özgüllüğü % 100 olarak bulundu. ELISA IgG için duyarlılık ve özgüllüğü ise sırası ile %95 ve %93 olarak saptandı. Kronik brucellozlu hastalar için ELISA IgG'nin duyarlılık ve özgüllüğü %86, %93iken ; ELISA IgM için %20, %100 olarak bulundu. ELISA ile değerlendirilen akut ve kronik brucellozlu her bir hastanın serumu Western Blot tekniği ile çalışılarak nitroselüloz memoranda spesifik protein bantlar tespit edildi. Hastalar topluca değerlendirildiğinde 10-89 kdal arasında değişen 15' e yakın farklı protein bandı gösterildi. Bunlar sırası ile 10 kdal (%12), 19 kdal (%24), 25 kdal (%6), 27 kdal (%38), 34 kdal(%42), 36 kdal (%48), 38 kdal (%34), 46 kdal (%8), 48 kdal (%44), 55 kdal (%36), 58 kdal (%14), 73 kdal (%18), 80 kdal (%18), 84 kdal (%24) ve 89 kdal (%28) olarak tespit edildi. Hastaların yaklaşık % 80'inde 27, 34, 36 ve 48 kdal'luk protein bantlarından en az iki veya daha fazlası ortak olarak gösterilmiştir. ELISA testinin akut ve kronik brucellozlu hastaların tanımlanmasında uygun bir yöntem olduğu, Western blot testi ile karşılaştırılarak gösterilmiştir.

SUMMARY The Detection of Serological Response to Brucella Infection by ELISA and Western Blotting Methods Using Whole Brucella Antigens. Brucellosis is a public health problem in many developing countries. The slow and hard growth of brucella species on special cultures caused development of several serological tests. For detecting incomplete IgG and IgM antibodies in acute and chronic brucellosis ELISA testing has an actual value and Western blotting has been used for confirming other tests results. Firstly we have studied ELISA IgG and IgM in acute and chronic brucellosis then evaluated these results for confirming with Western blotting. In this study 50 patients diagnosed as acute or chronic brucellosis were examined. In acute patients the sensitivity and specificity of ELISA IgM were 100% and of ELISA IgG were 95% and 93%, respectively. In chronic patients the sensitivity of IgG was 86% while specificity was 93% but for IgM the sensitivity and specificity were 20% and 100%, respectively. In our Western blotting study there was antibody response to nearly 15 protein bands and their molecular masses were between 10-89 kdal. The molecular weights(MW) and frequencies of the most significant bands were the following:10 kdal (12%), 19 kdal (24%), 25 kdal (6%), 27 kdal (38%), 34 kdal(42%), 36 kdal (48%), 38 kdal (34%), 46 kdal (8%), 48 kdal (44%), 55 kdal (36%), 58 kdal (14%), 73 kdal (18%), 80 kdal (18%), 84 kdal (24%) and 89 kdal (28%). 80% of the patients had antibody response to 2 or more protein bands MW of 27kdal, 34 kdal, 36 kdal and 48 kdal. By confirming ELISA results by Western Blotting, we have shown that ELISA test is rapid, highly sensitive and specific in the diagnosis of acute or chronic brucellosis. 63