İn vitro fertilizasyon hastalarından elde edilen granuloza hücrelerindeki intrasellüler kalsiyum düzeyinin ve oksidan parametrelerin oosit kalitesine ve fertilizasyon oranlarına etkisi

Abstract

İnfertilite 1 yıl korunmasız cinsel ilişkiye rağmen gebe kalınamaması durumudur. İnfertilite etyolojisinin yaklaşık %30'unu oluşturan kadın faktörünün en önemli kısmı ovulatuar bozukluklar ve tuboperitoneal faktörlerdir. Granuloza hücreleri oositle yakın temas halinde olan oositin büyüme, gelişme, maturasyonu ve fertilizasyonunda önemli olan hücrelerdir. Granuloza hücreleri oositi oksidatif stresin zararlı etkilerinden korurlar. Fertilizasyon başarısını tahmin etmede oositin kendisi ve granuloza hücrelerinin değerlendirilmesi önem taşır. Hücresel olaylar sonucu açığa çıkan serbest radikaller, antioksidan tamponlama sistemleri tarafından zararsız ürünlere dönüştürülmektedir. Bu durum organizmada her zaman bir denge içindedir. Bu dengenin oksidatif ajanlar lehine bozulması sonucu oksidatif stres meydana gelerek hücreler apoptozise gider. Ca+2, hücresel olaylarda ikincil haberci olarak görev alan bir iyondur. Oosit maturasyonu ve fertilizasyonda Ca+2'in önemli görevleri vardır.Bu çalışmanın amacı granuloza hücrelerinde GSH, MDA, [Ca+2]i ve GSH-Px aktivitesi değerlerinin oosit kalitesi ve fertilizasyona etkisini araştırmaktır.İn vitro fertilizasyon hastalarından kontrollü overyan hiperstimulasyon sonucu elde edilen foliküller oosit pick up işlemi ile toplanarak oositin etrafındaki granuloza hücreleri ayrıldı. Bu hücrelerdeki GSH, MDA, [Ca+2]i ve GSH-Px aktivitesi değerlerine bakıldı. Granuloza hücreleri alınan oosit gradelendi ve fertilize olup olmadığı takip edildi. Oosit gradeleri ile fertilizasyon arasında, oosit gradeleri ile GSH, MDA, [Ca+2]i ve GSH-Px aktivitesi değerleri arasında, fertilizasyon ile GSH, MDA, [Ca+2]i ve GSH-Px aktivitesi değerleri arasında, verilen ilaç protokolü ile fertilizasyon arasında, verilen ilaç protokolu ile GSH, MDA, [Ca+2]i ve GSH-Px aktivitesi değerleri arasında ilişki olup olmadığına bakıldıVerilen ilaç protokolu ile fertilizasyon arasında anlamlı bir ilişki saptanmadı. Oosit gradeleri ile fertilizasyon oranı arasında anlamlı bir ilişki saptandı (p<0,05). Oosit kalitesi iyileştikçe fertilizasyon oranında artma izlendi. Fertilize olan oositlerde Ca+2 ve GSH değerleri anlamlı olarak yüksek, GSH-Px aktivite değerleri ise fertilize olmayan oositlerde anlamlı olarak yüksek bulundu. MDA ile fertilizasyon arasındaki anlamlı bir farklılık saptanmadı. Oosit kalitesi arttıkça Ca+2 düzeylerinde de istatistiksel olarak anlamlı bir artış saptandı.Sonuç olarak çalışmamızda granuloza hücrelerindeki Ca+2 miktarının artması oosit kalitesi ve fertilizasyonu olumlu yönde etkilemektedir. GSH değeri yüksek olan oositlerde fertilizasyon oranı yüksek saptanmıştır. GSH-Px aktivite değeri ise fertilize olmayan oositlerde daha yüksek olarak bulundu.Anahtar kelimeler: İn vitro fertilizasyon, granuloza hücreleri, oksidatif stres, Ca+2

The Effects of Intracellular Ca2+ and Oxidant Parameters On Fertilization Ratio and Oocyte Quality on Granulosa Cells Which Was Taken From in Vitro Fertilization PatıentsInfertility is defined as the failure to conceive a recognized prenancy after 1 year of unprotected intercourse. 30 % of infertility etiology is the female factor. The most important female factors are ovulatuar disorders and tuboperitoneal factors. Granulosa cells are closed relationship with oocyte and they have important roles on oocyte development, maturation and fertilization. Granulosa cells protect the oocyte from the harmful effects of oxidative stres. Evaluation of the oocyte and granulosa cells are important for prediction of the fertilization success. The free radicals may occur in normal physological conditions. They can be neutralized by antioxidant mechanisms. This situation is always under balance. İf this balance change against to oxidant parameters -is called oxidative stres- the cells may go under apoptosis. Ca2+ is an universal cation which has important roles on fertilization and oocyte maturation.The aim of this study is to investigate the effects of GSH, MDA, intracellular Ca2+ release and GSH-Px activity levels on fertilization and oocyte quality in granulosa cells.After contolled overian hiperstimulation, the folliculles was taken via oocyte pick up process from in vitro fertilization patients and granulosa cells are seperated from oocyte. We evaluated the levels of GSH, MDA and intracellular Ca2+ release, GSH-Px activity in granulosa cells. We did a classification to the oocytes which was seperated from granulosa cells and we observed the fertilization of this oocytes. We evaluated if there was a relationship between oocyte quality and fertilization ratio, oocyte quality and GSH, MDA, Ca2+, GSH-Px activity levels, fertilization and GSH, MDA, Ca2+, GSH-Px activity levels, drug protcol and fertilization.There wasn?t any statistically importance between drug protocol and fertilization. We determined statiscally significant importance between oocyte quality and fertilization (p<0,05). When the oocyte quality was increased the fertilization ratio was also increased. The levels of GSH and Ca2+ were higher in fertilized group than unfertilized group and it was statiscally important (p<0,05). GSH-Px activity level was higher in unfertilized group than fertilized group. There was no statiscally importance between each group in MDA levels. We also determined that Ca2+ levels were higher when the oocyte quality was increasedAs a result of our study the increased amount of Ca2+ levels also increase oocyte quality and fertilization rate. If the GSH levels were higher then the fertilization ratio was higher. But GSH-Px activity levels were higher in unfertilized group.Key words: In vitro fertilization, granulosa cells, oxidative stress, Ca2+