Pankreatik duktal adenokarsinoma hücrelerinde CD44`ün, ekstrasellüler matriks yıkımına olan etkisinin değerlendirilmesi

Abstract

Pankreatik duktal adenokarsinoma (PDAC) mortalitesi en yüksek kanser türleri arasında yer alır. PDAC'in erken evrede metastaza uğraması ve erken tanı belirteçlerinin olmaması, bunun yanı sıra hastalığa karşı geliştirilen ilaç stratejilerin yoğun desmoplastik stroma nedeniyle kanser hücrelerine ulaşamaması tedaviyi zorlaştırmaktadır. Bu tez çalışmamızda hücre yüzey adezyon reseptörü olan CD44 transmembran glikoproteinin ekstrasellüler matriks yıkımına olan etkisini değerlendirmek için Panc-1 ve MiaPaCa-2 hücre hatlarında CD44 siRNA transfeksiyonu sonrası CD44 ve İntegrin β1 mRNA ekspreyonu, kollajen IV ve fibronektin protein ekspresyonu seviyeleri belirlenmiştir. 50 nM CD44 siRNA uygulaması sonrası Panc-1 hücrelerinde hücre canlılığı %55,4, MiaPaCa-2 hücrelerinde ise %52,5 olarak görülmüştür. Uygulanan CD44 siRNA dozajının hücrelerde sitotoksisiteye yol açmadığı tespit edilmiştir. CD44 siRNA transfeksiyonu sonucu CD44 ve integrin β1 mRNA ekspresyonu Panc-1 hücrelerinde sırasıyla 0,13 ve 0,35 olarak değerlendirilmiştir. MiaPaCa-2 hücrelerinde ise CD44 mRNA ekspresyon seviyesi 0,08, integrin β1 mRNA ekspresyon seviyesi ise 0,20 düzeyinde değerlendirilmiştir. CD44 siRNA transfeksiyonuna bağlı fibronektin ve kollajen IV protein ekspresyon seviyeleri incelendiğinde Panc-1 hücrelerinde fibronektin protein ekspresyon seviyesi 0,81, kollajen IV protein ekspresyon seviyesi ise 0,87 olarak tespit edilmiştir. MiaPaCa-2 hücrelerinde ise fibronektin protein ekspresyon seviyesi 0,39, kollajen IV protein ekspresyon seviyesi 0,52 olarak tespit edildi. Çalışma sonuçlarına göre CD44 proteinin ekstrasellüler matriks yıkımında MiaPaCa-2 hücreleri üzerinde Panc-1 hücrelerine göre daha fazla etkili olduğu değerlendirildi.Anahtar Kelimeler: CD44, Ekstrasellüler Matriks, siRNA, PDAC

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is most lethal cancer in many cancer types. PDAC's early metastasis and lack of early diagnostic markers, as well as drug strategies developed against the disease, cannot reach cancer cells due to intense desmoplastic stroma. In this study, we evaluated CD44 and Integrin β1 mRNA expression, collagen IV and fibronectin protein expression after CD44 siRNA transfection in Panc-1 and MiaPaCa-2 cell lines in order to evaluate the effect of cell surface adhesion receptor CD44 transmembrane glycoprotein on extracellular matrix destruction. Cell viability was %55,4 in Panc-1 cells and %52,5 in MiaPaCa-2 cells after 50 nM CD44 siRNA application. It was determined that the administered CD44 siRNA dosage did not cause cytotoxicity in the cells. CD44 and integrin β1 mRNA expression as a result of CD44 siRNA transfection was evaluated as 0,13 and 0,35 in Panc-1 cells, respectively. In MiaPaCa-2 cells, CD44 mRNA expression level was 0,08 and integrin β1 mRNA expression level was 0,20. When the fibronectin and collagen IV protein expression levels due to CD44 siRNA transfection were examined, fibronectin protein expression level was 0,81 and collagen IV protein expression level was 0,87 in Panc-1 cells. In MiaPaCa-2 cells, fibronectin protein expression level was 0,39 and collagen IV protein expression level was 0,52. According to the results of the study, it was evaluated that CD44 protein was more effective on MiaPaCa-2 cells than Panc-1 cells in extracellular matrix destruction.Keywords: CD44, Extracellular Matrix, siRNA, PDAC