Salmonella Enteritidis` özgün SEnt-P5 ve SEnt-P6 bakteriyofajların karakterizasyonu

Abstract

Bu tezin amacı Salmonella Enteritidis'i enfekte eden SEnt-P5 ve SEnt-P6 bakteriyofajlarını saflaştırmak, morfolojik özelliklerini, konak hücre aralıklarını, enfeksiyon çokluğu değerlerini (MOI), konakçı hücreye karşı litik aktivitelerini, adsorpsiyon oranlarını, gelişme kurvelerini, pH, ısıl işlem ve depolama koşullarında stabilitelerini tespit etmektir. Araştırma sonucunda, SEnt-P5 ve SEnt-P6 kodlu fajların kuyruklu ve Siphoviridae familyasına ait oldukları, MOI ve mutant frekans değerlerinin ise sırasıyla 0,01-0,0001 ve 5,92×10-7-3,50×10-7 olduğu belirlenmiştir. İnkübasyonun ilk 5 dakikasında konak hücrelerine %96-98 oranında adsorbe oldukları, latent periyotlarının 5-10 dk, patlama süreleri ile sayılarının sırasıyla 20 dk ve 277-351 olduğu saptanmıştır. Geniş pH (2-13) aralıklarına, yüksek sıcaklık (80-90°C) uygulamalarına karşı dirençli oldukları, 4, 25 ve 35, -20, -80°C'de 3 aylık depolama süresince stabilitelerini korudukları belirlenmiştir. Fajların etki ettiği konak hücre aralığının geniş olduğu, diğer S. enterica serovarlarına ve bazı E. coli suşlarına karşı da enfektif oldukları bulunmuştur. Her iki fajın hem 25 ve 35°C'de hem de buzdolabı sıcaklığında konak hücrelerini çok etkili bir şekilde imha ettikleri gözlenmiştir. Sonuç olarak SEnt-P5 ve SEnt-P6 fajları, gıda kaynaklı patojen olan S. Enteritidis'e karşı gıda endüstrisinde biyokoruyucu ajan olarak kullanılma potansiyeline sahiptirler.Anahtar Kelimeler: Bakteriyofaj, biyokoruyucu, Salmonella Enteritidis

The aim of this thesis were to purify SEnt-P5 and SEnt-P6 bacteriophages infecting Salmonella Enteritidis and to determine their morphological properties, host ranges, multiplicity of infection (MOI), lytic activity against host cell, adsorption rates, growth curve, pH, heat treatment and storage stability. As a result of the study, SEnt-P5 and SEnt-P6 phages belong to the Syphoviridae family, and their MOI and mutant frequency values were 0.01-0.0001 and 5.92×10-7 – 3.50×10-7, respectively. It was determined that they adsorbed to their host cells by 96-98% in the first 5 minutes of incubation, and their latent periods, burst time and burst size were 5-10 min, 20 min and 277-351 PFU/mL, respectively. They were resistant to wide pH ranges (2-13) and high temperature (80-90°C), and they maintained their stabilities during 3 months storage at 4, 25, 35, -20 and -80°C. SEnt-P5 and P6 phages had wide host ranges and in addition to S. Enteritidis, they were infective against other S. enterica serovars and some E. coli strains. Both phages had strong infective effect against their host cells at either 25 and 35°C or refrigerator temperature. Consequently, SEnt-P5 and P6 phages have potency to be used as a biocontrol agent against food-borne pathogenic S. Enteritidis in the food industry.Keywords : Bacteriophage, biopreservation, Salmonella Enteritidis