Sıtmada tedavi sürecinin real time PCR ile takibi: İn vivo modelde

Abstract

Amaç: Sıtma tanısında ve hastanın takibinde altın standart yöntem mikroskopi olarak kabul edilmektedir. Fakat doğru bir tanı ve hasta takibi için deneyimli bir personele gereksinim vardır. Bu nedenle mikroskopi yöntemini destekleyecek bir yöntemle tanıyı doğrulamak çok önemlidir. Çalışmamızda sıtmanın tedavisinin takibinde mikroskopik yöntemlerin yanı sıra Real Time PCR'ın kullanımının uygunluğunun araştırılması amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Araştırmamızda her grupta 5 adet erkek Balb/c farenin bulunduğu 5 grup oluşturulmuştur. Her bir fare intra peritonal olarak 107 /ml P. berghei paraziti ile enfekte edilmiştir. I., II. ve III. grupta bulunan farelere sırasıyla bir gün, iki gün ve üç gün 50 mg/kg/gün Klorokin tedavisi enfeksiyonun verildiği günden 2 gün sonra uygulanmıştır. IV. grup farelere tedavi uygulanmamış, V. grup farelere üç gün serum fizyolojik verilmiştir. Parazitemi durumu 21 gün boyunca farelerin kuyruk ucundan alınan kandan yapılan preparatların kontrolü ve Real Time PCR ile Plasmodium'a ait hedef gen bölgesinin varlığı kontrol edilmiştir.Bulgular: I., II., IV. ve V. grupta bulunan farelerin boyalı preparatlarının ve Real Time PCR sonuçlarının pozitif olduğu görülmektedir. III. Grup farelerin 5. ve 7. gün boyalı preperatlarında pozitiflik görülürken diğer preparatları negatif olarak değerlendirilmiştir. Real Time PCR sonuçlarında ise 7. gün pozitiflik görülürken diğer günlerde parazite ait hedef gen bölgesi saptanamamıştır.Sonuçlar: Mikroskopi yöntemi ile Real Time PCR yöntemi karşılaştırıldığında her iki yönteminde paralel sonuç verdiği görülmektedir. Mikroskopi yöntemi dışında Real Time PCR yönteminin de kullanılması sıtma tanısında ve hasta takibi açısından önemli olduğu ve birbirini destekleyen farklı yöntemlerin kullanılması gerektiği kanısına varılmıştır.

Objective: Although the gold standard method for diagnosis of malaria and follow-up of the patient is accepted as microscopy, an experienced staff is required for accurate diagnosis and patient follow-up by microscopy. Therefore, it is very important to confirm the diagnosis with a method to support the microscopy method. In our study, it was aimed to investigate the suitability of the use of Real Time PCR, as well as microscopic methods, following the treatment of the malaria.Materials and Methods: In our study, 5 groups of 5 male Balb/c mice were formed in each group. Each mouse was intraperitoneally infected with 107 / ml Plasmodium berghei parasites. The mice in the first, second and third groups received 50 mg/kg/day of chloroquine treatment one day, two days and three days respectively, 2 days after the day of infection. The fourth group of rats was not treated and the fifth group of rats was given saline treatment for three days. The parasitemia state was checked for 21 days by checking the blood preparations made from the tail end of the mice and searching the parasite DNA by Real Time PCR.Results: When the results were evaluated, I, II, IV. and V. group, and Real Time PCR results are positive. III. group mice were found to be positive on the 5th and 7th day of the preparation, and the subsequent preparations were evaluated as negative. Real Time PCR results showed positive on day 7, but no parasite DNA was detected on other days.Conclusions: When the method of microscopy and Real Time PCR is compared, it is seen that both methods give parallel results. The use of the Real Time PCR method in conjunction with the microscopy method has led to the conclusion that different methods should be used to support each other in the diagnosis of malaria.