Kuru fasulye (Phaseolus vulgaris L.) bitkisinden peroksidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Peroksidazların çeşitli endüstriyel ve biyokimyasal alanlarda etkileri olduğundan saflaştırma ve karakterizasyon çalışmaları önem arzetmektedir. Bu çalışmada peroksidaz enzimi (POD) farklı tekniklerle kuru fasulye (Phaseolus vulgaris L.) bitkisinden saflaştırıldı, karakterize edildi, kinetik özellikleri belirlendi ve inhibisyon çalışması yapıldı. Fasulyedeki POD, (NH4)2SO4 çöktürme, diyaliz, CM-Sephadex ve jel filtrasyon kromatografileri kullanılarak saflaştırıldı. Saflaştırılan POD enziminin saflığını kontrol etmek ve molekül kütlesini belirlemek için SDS-PAGE yapıldı ve molekül kütlesi 45 kDa bulundu. Ham ekstredeki POD enzimi üzerine yapılan karakterizasyon çalışmalarında optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık ve stabil pH sırasıyla 5,0, 0.3 M, 30 ºC, 5,0 olarak tespit edildi. Km ve Vmax değerleri Linewear-Burk grafiği çizilerek hesaplandı. Guaiakol ve H2O2 substratları için enzimin Km değerleri sırasıyla 0,0154 ve 0,065 olarak belirlendi. POD enzimi üzerinde CTAB (setil trimetilamonyum bromür), EDTA(etilendiamintetra asetik asit), sitrik asit ve sodyum azidin inhibisyon etkisi incelendi ve en yüksek inhibisyon etkisi sodyum azidde (%99 inhibisyon) gözlendi.

Since peroxidases have effects on various industrial and biochemical fields, purification and characterization studies are continuing. In this study, peroxsidase enzyme (POD) was purified from bean (Phaseolus vulgaris L.) using different techniques, Kinetic characteristics were determined and inhibition study was performed. POD from haricot bean was purified using (NH4)2SO4 precipitation, dialysis, CM-Sephadex and anion exchange chromatography. SDS-PAGE was performed to check the purity of the purified POD enzyme and to determine the molecular mass. The molecular mass was found to be 45 kDa. The optimum pH, optimum ionic strength, optimum temperature and stabil pH for POD were determined as 5.0, 0.3 M, 30 ºC, 5.0 in crude extract, respectively. Km and Vmax values were calculated by plotting Lineweaver-Burk graph. The Km values of the enzyme for the guaiacol and H2O2 substrates were determined as 0.0154 and 0.065, respectively. The inhibitory effects of CTAB (cetyl trimethylammonium bromide), EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), citric acid and sodium azide on POD enzyme were examined and the highest inhibitory effect was observed for sodium azide (99% inhibition).