Citrus limonum ve mentha piperta`nın influenza a virus replikasyonu üzerindeki etkisi ,viral replikasyonda antiviral ilaçlarla etkileşiminin araştırılması

Abstract

AMAÇ: Influenza viruslar dünya çapında en önemli mortalite ve morbidite sebeplerinden biridir. Günümüzde influenza yakarşık orunmanın en önemli yolu aşılanmadır. Aşılanma oldukça güçlü bir alternative gibi görünse de virusun sık ve kolayca mutasyona uğrayabilme olasılığı güçlü antiviral ilaçlara gereksinimi doğurmaktadır. Biz bu çalışma da limon (Citrus Limonum) ve nane (Mentha Piperta)'nin ekstrelerinin/esensiyel yağlarının influenza A virus replikasyon üzerindeki etkisini ve bu ekstrelerin/esensiyel yağların influenza virus A replikasyonunda antiviral ilaçlarla etkileşimini araştırdık.MATERYAL VE YÖNTEM:Çalışmada öncelikle Citrus Limonum ve Mentha Piperta'nın esansiyel yağlarının sağlıklı hücre hatlarında non-sitotoksik konsantrasyonları tespit edildi. Deneylerde hücre sitotoksisite çalışmalalarının belirlenmesi için MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) yöntemi kullanıldı. Non sitotoksik konsantrasyonlar belirlendikten sonar bu konsantrasyonlar içerisinde antiviral etkinlik çalışmaları gerçekleştirildi. Esansiyel yağların influenza virus A'ya karşı etkinlik çalışmaları IC50 değerleri ve viral replikasyon titreleri real-time PCR yöntemiyle değerlendirildi.Bulgular: Çalışmada Citruslemonumve Menhthapiperita'nınesansiyel yağlarının sağlıklı hücre hatlarında toksik olmayan dozlarını sırasıyla 1.256 ve 0.625 g/ml olarak tespit ettik. Antiviral etkinlik tespit edilen bu konsantrasyonlardan daha düşük konsantrasyonlarda anlamlı olacağından, çalışmalarımızda H1N1'e karşı aktivite çalışmaları bu konsantrasyonların altında olan konsantrasyonlarda çalışılmıştır. Citrus limonumesansiyel yağlarının 0.039 g/ml düzeyinde inkübasyonun 72. saatinden itibaren antiviral etkinlik gösterdiği tespit edilirken, Metnthapiperita'nınantiviral etkinliğinin 0.078g/ml konsantrasyonlarında inkübasyonun 72. saatinden sonra hücre canlılıklarında istatiksel olarak anlamlı derecede azalmanın olduğu tespit edilmiştir (p<0.01). Ayrıca, Citruslemonum ve Menthapiperita'nınesansiyel H1N1'e karşı oldukça güçlü antiviral aktivite gösterdiği tespit edilmiştir. Esansiyel yağların 0.078 g/ml konsantrasyonda etkinliğinin 100 TCID50infeksititedekivirusa karşı (H1N1) standart ilaç olan Osetelmivirinantiviral etkinliğinden anlamlı derecede yüksek olduğu saptanmıştır (p<0.01).Sonuçlar: Hem Citruslemonum hem de Menthapiperita'nınesansiyel yağlarının H1N1'e karşı antiviral etkinliği oldukça dikkate değer bulunmuştur. Bitkilerin esansiyel yağ karışımlarının standart ilaç olan Osetalmivir ile sergilediği antiviral etkinlik, gösterdikleri sinerjistik aktivite de ilaç direncinin sorun olduğu günümüzde oldukça değerlidir. Ayrıca bu iki bitki fitokimyasallarının kombine kullanımlarının influenzavirusların tedavisinde yeni ilaç araştırmaları için umut olabileceğini düşünmekteyiz. Anahtar kelimeler: Citrus limonum, Mentha piperta, esansiyelyağ, influenza virus, PCR.

Aim: Influenza viruses are among the major causes of mortality and morbidity worldwide. Today, vaccination is the most important way to prevent influenza. Although vaccination appears to be a very powerful alternative, frequent and easy mutation of the virus increases the need for effective and potent antiviral drugs. In this study, we investigated the effect of essential oils of lemon (Citrus limonum) and peppermint (Mentha piperta) on influenza A virus replication and the interaction of these essential oils with Osetelmavir on influenza virus A replication.Material and Method: Firstly, non-cytotoxic concentrations of essential oils of Citrus Limonum and Mentha Piperta were determined in healthy cell lines. In the experiments, MTT (3- (4,5-Dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) method was used for determination of cell cytotoxicity studies. After non-cytotoxic concentrations were determined, antiviral efficacy studies were performed within these concentrations. The efficacy of essential oils against influenza virus A was determined by real-time PCR and C50 values and viral replication titers. Results: In the study, we found non-toxic doses of essential oils of Citrus lemonum and Menhtha piperita in healthy cell lines as 1.256 and 0.625 microgramg/ml, respectively. Activity studies against H1N1 were studied at concentrations below these concentrations found to be non-toxic to cells. The antiviral activity of Citrus limonum was found to be 0.039 microgramg / ml after 72 hours of incubation, whereas the antiviral activity of Metntha piperita was found to be 0.078 microgram / ml after 72 hours of incubation. It was found that there was a statistically significant decrease in cell viability at these concentrations compared to the control group (p <0.01). Citrus lemonum and Mentha piperita have been shown to have strong antiviral activity against essential H1N1. The efficacy of essential oils at a concentration of 0.078 micrograms / ml was found to be significantly higher than the antiviral activity of the standard drug, Osetelmivir, against the virus (H1N1) in 100 TCID50 infectivity (p <0.01).Conclusion: The antiviral activity of both essential oils of both Citrus lemonum and Mentha piperita against H1N1 has been found to be remarkable. The antiviral activity and synergistic activity exhibited by the essential oils of these plants and Osetalmivir, the standard drug, are now highly valued. We also think that the combined use of these two plant phytochemicals may be the hope for new drug research in the treatment of influenza viruses.Key words: Citrus limonum, Mentha piperta, essential oil, influenza virus, PCR.