Çipura (sparus aurata) karaciğer mikrozomlarında ilaçları metabolize eden enzimlerin karakterize edilmesi ve yaşlanma ile ilişkisinin araştırılması

Abstract

PAMUKKALE ÜNİVERSİTESİFEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜTEZ ÖZET BİLDİRİ FORMUKİMYA ANABİLİM DALIÇİPURA (SPARUS AURATA) KARACİĞER MİKROZOMLARINDAİLAÇLARI METABOLİZE EDEN ENZİMLERİNKARAKTERİZE EDİLMESİ VE YAŞLANMA İLE İLİŞKİSİNİN ARAŞTIRILMASIHatice ARDAĞ AKDOĞANÖZETSitokrom P450 enzimleri; retinoidler, biyojenik aminler, prostaglandinler, yağ asitleri, vitamin D3,safra asitleri, endojen bileşikleri içeren steroitler, gıda katkı maddeleri, çevre kirleticileri, boyalar,anestezik ajanlar, organik çözücüler, pestisitler ve ilaçlar gibi ksenobiyotiklerin detoksifikasyon veaktivasyonunda önemli rol oynayan hemoprotein süper ailesidir. Sitokrom P450 ailesi (CYP450),karaciğerdeki faz I metabolik enzim sisteminin önemli bir enzim grubunu oluşturur.Bu çalışmada farklı yaşlardaki çipura (Sparus aurata) balığı karaciğer mikrozom ve sitozolleri örnekolarak kullanıldı. Bu çalışmada kullanılan çipura (Sparus aurata) balığı, Türkiye'nin Ege bölgesindebulunan, İzmir'deki Pınar Balık işletmesinden temin edildi. Karaciğer mikrozom ve sitozolleri Arınç veŞen metoduna göre hazırlandı. Etoksirezorufin O-deetilaz (EROD), Metoksirezorufin O-demetilaz(MROD), Pentiloksirezorufin O-depentilaz (PROD), Benziloksirezorufin O-debenzilaz (BROD), Anilin 4-hidroksilaz (A4H), N-nitrosodimetilamin N-demetilaz (NDMA-DE), Kafein N-demetilaz (CN3D),Aminopiren N-demetilaz (APND) ve Eritromisin N-demetlaz (ERND); çipura (Sparus aurata) balığıkaraciğer mikrozomlarında tayin edildi. Sitozolik Glutatyon S-transferaz (GST-CDNB); çipura (Sparusaurata) balığı karaciğer sitozollerinde tayin edildi.Yapılan ölçümler sonucunda; farklı gelişim evrelerindeki (1,5, 4, 8, 9, 11, 15, 20, 24 aylık) çipura(Sparus aurata) balıkları, karaciğer mikrozumlarında anilin 4-hidroksilaz, N-Nitrosodimetilamin N-Demetilaz ve eritromisin N-Demetilaz aktivitelerinde yaş artışı ile paralel olarak artış gözlemlendi. 1,5aylık balıktaki A4H aktivitesi; 0,002 ± 0,001 nmol/dakika/mg protein iken, 24 aylık balıkta 0,058 ± 0,002nmol/min/mg protein olarak bulundu. 1,5 aylık balıktaki ERND aktivitesi; 0,09 ± 0,006 nmol/dakika/mgprotein iken, 24 aylık balıktaki aktivite 0,189 ± 0,008 nmol/min/mg protein şeklinde ölçüldü. 1.5 aylıkbalıktaki NDMA-ND aktivitesi; 0,019 ± 0,007 nmol/dakika/mg protein iken, 24 aylık balıktaki aktivite;0,323 ± 0,014 nmol/dakika/mg protein olarak tespit edildi.Kafein N-Demetilaz ve Aminopiren N-Demetilaz aktivitelerinde, yaş artışıyla birlikte azalışgözlemlendi. 1,5 aylık balıktaki CN3D aktivitesi; 0,438 ± 0,014 nmol/dakika/mg protein iken, 24 aylıkbalıktaki aktivite; 0,069 ± 0,012 nmol/dakika/mg protein olarak bulundu. 1,5 aylık balıktaki APNDaktivitesi; 0,944 ± 0,024 nmol/dakika/mg protein iken, 24 aylık balıktaki aktivite; 0,056 ± 0,011nmol/dakika/mg protein şeklinde tespit edildi.Çipura (Sparus aurata) balığı karaciğer mikrozomlarında EROD ve PROD aktivitelerinde, yaşarışıyla paralel olarak bir artış gösterirken MROD ve BROD aktiviteleri tayin edilemedi. 9 aylıkbalıktaki EROD aktivitesi; 88,6 ± 1,1 pmol/dakika/mg protein, 24 aylık balıktaki aktivite; 998,4 ± 13,7pmol/dakika/mg protein olarak bulundu ve 1,5-9 aylık balıklarda EROD aktivitesi gözlenmedi. 15 aylıkbalıktaki PROD aktivitesi; 285,6 ± 20,9 pmol/dakika/mg protein, 24 aylık balıktaki aktivite; 613,7 ± 16,3pmol/dakika/mg protein olarak belirlendi. 1,5-15 aylık balıklarda PROD aktivitesi gözlenmedi.GST-CDNB aktivitesinin de yaş artışı ile artış gösterdiği belirlendi. 1,5 aylık balıktaki GST-CDNBaktivitesi; 17,71 ± 0,54 pmol/dakika/mg protein, 20 aylık balıktaki aktivite; 690,9 ± 32,0 pmol/dakika/mgprotein şeklinde tespit edildi.

PAMUKKALE ÜNİVERSİTESİFEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜTEZ ABSTRACT BİLDİRİ FORMUGRADUATE PROGRAM IN CHEMISTRYCHARACTERIZATION OF AGING OF DRUG METABOLIZING ENZYMES ANDASSESSMENT OF AGING IN GILTHEAD SEABREAM (SPARUS AURATA) LIVERMICROSOMESHatice ARDAĞ AKDOĞANABSTRACTCytochrome P450 (CYP) comprises a superfamily of hemoproteins that play a pivotal role in the activationand detoxification of xenobiotics such as drugs, pesticides, antioxidants, organic solvents, anesthetic agens, dyes,enviromental pollutants and food additives and endogenous compounds including steroids, bile acids, vitaminD3, fatty acids, prostaglandins, biogenic amines and retinoids. The cytochrome P450 (CYP450) family is themajor phase I metabolic enzyme system in the liver.In this study, gilthead seabream (Sparus aurata) fish liver microsomes and cytosol of different ages wereused as sample. The fish used in this study, Gilthead Seabream (Sparus Aurata), were bought from Pinar Fish inİzmir, Aegean coast of Turkey. In this study Gilthead Seabream (Sparus Aurata) Fish Liver Microsomes andcytosoles of different ages (ranging from 1.5 to 24 months) were used. Liver microsomes and cytosoles wereprepared according to the method of Arinc and Sen (1998). Liver microsomal Ethoxyresorufin O-deethylase(EROD), methoxyresorufin O-demethylase (MROD), penthyloxyresorufin O-depenthylase (PROD),benzyloxyresorufin O-debenzylase (BROD), aniline 4-hydroxylase (A4H), N-nitrosodimethylamine N-demethylase (NDMA-DE), aminopyrene N-demethylase (APND) ve erytromycin N-demethylase (ERND) weredetermined from this Gilthead Seabream (Sparus aurata) fish liver microsomes.A4H activity increased with aging. While 1.5 months of the fish activity is 0,002 ± 0,001 nmol/dakika/mgprotein, 24 months of the fish is 0,058 ± 0,002 nmol/min/mg protein. ERND activity increased in giltheadseabream (Sparus aurata) liver microsomes of different ages (ranging from 1.5 to 24 months). 1.5 months of thefish activity is 0,09 ± 0,006 nmol/dakika/mg protein, 24 months of the fish is 0,189 ± 0,008 nmol/min/mg protein.NDMA-ND activity increased in gilthead seabream (Sparus aurata) liver microsomes of different ages (rangingfrom 1.5 to 24 months). 1.5 months of the fish activity is 0,019 ± 0,007 nmol/min/mg protein, 24 months of thefish is 0,323 ± 0,014 nmol/min/mg protein.CN3D activity decreased in gilthead seabream (Sparus aurata) liver microsomes of different ages (rangingfrom 1.5 to 24 months). 1.5 months of the fish activity is 0,438 ± 0,014 nmol/min/mg protein, 24 months of thefish is 0,069 ± 0,012 nmol/min/mg protein. APND activity decreased in gilthead seabream (Sparus aurata) livermicrosomes of different ages (ranging from 1.5 to 24 months). 1.5 months of the fish activity is 0,944 ± 0,024nmol/min/mg protein, 24 months of the fish is 0,056 ± 0,011 nmol/min/mg protein.EROD activity increased in gilthead seabream (Sparus aurata) liver microsomes of different ages (rangingfrom 1.5 to 24 months). 9 months of the fish activity is 88,6 ± 1,11 pmol/min/mg protein, 24 months of the fish is998,4 ± 13,7 pmol/min/mg protein. 1.5 to 9 months of the fish liver activity were not detected. PROD activityincreased in gilthead seabream (Sparus aurata) liver microsomes of different ages (ranging from 1.5 to 24months). 15 months of the fish activity is 285,6 ± 20,9 pmol/dakika/mg protein, 24 months of the fish is 613,7 ±16,4 pmol/dakika/mg protein. 1.5 to 15 months of the fish liver activity were not detectable. MROD and BRODactivities were not detectable.Glutathione S-transferase (GST) were determined from this Gilthead Seabream (Sparus aurata) fish liverscytosoles. GST-CDNB activity increased in gilthead seabream (Sparus aurata) liver microsomes of differentages (ranging from 1.5 to 20 months). 1.5 months of the fish activity is 17,7 ± 0,5 pmol/dakika/mg protein, 20months of the fish is 690,9 ± 32,0 pmol/dakika/mg protein.