Östrodiol reseptör pozitif ve negatif dokularının tayini için kit geliştirilmesi

Abstract

ÖZET: ÖSTRODİOL RESEPTÖR POZİTİF VE NEGATİF DOKULARININ TAYİNİ İÇİN KİT GELİŞTİRİLMESİ Sulandırılmış parafin kesitlerde, kovalent olarak yeniden düzenlenen östrodiolün hedef hücrelerinin saptanması, immünohistokimyasal teknik kullanılarak, 1998 yılında Jungblut ve Sierralta tarafından sunulmuştur. Difüzyonla ortamdan uzaklaşan bileşiklerin hücre içinde veya hücre alt birimlerinde hareketsiz hale getirilmesi, dile düşmüş zorluktadır ve tuzaklarla doludur. Geçen kırk yılda çeşitli teknikler tavsiye edilmiştir ve bol bol iddialar mevcuttur. Fakat bu iddiaların çoğu bir kenara itilmiştir. Asetik asit, formaldehid içerisinde östrodiol, bağlı olduğu reseptöründen serbest bırakılır ve Mannich reaksiyonu ile moleküler çevresinde tutulur. Bu sayede östrodiolün difüzyonu engellenir. İmmünohistokimyasal teknik kullanılarak östrodiol fikse edildiği hedef hücresinde görülebilir. Marmara Üniversitesi Tıp Fakültesi Etik Kurulu onayı ile yaklaşık sekiz ayda, dokuzu meme kanseri vakası, üçü endometrium olmak üzere toplam 12 doku toplanmıştır. Ameliyattan hemen sonra, örnekler %10 asetik asit, %4 formaldehid çözeltisi içerisinde bekletilmiştir. Minimum dört saatlik fiksasyondan sonra örnekler, parafinize edilmiştir. 4-5 um kalınlığında kesitler kesilmiş ve immünohistokimyasal teknik kullanılarak anti-östrodiol uygulanmıştır. Klasik immünohistokimyasal yöntem kullanılarak, meme kanseri olgularının ve endometriumlann epitel ve tümör hücrelerinin çekirdeklerinde östrodiol reseptör saptanmıştır. Ne yazık ki, anti-östrodiol kullanılarak yapılan immünohistokimyasal çalışmalarda çekirdeksel boyama gerçekleşmemiştir. Fakat sitoplazmik boyama saptanmıştır.

ABSTRACT THE PRODUCTION OF A KIT FOR IDENTIFICATION OF ESTRADIOL RECEPTOR POZITDJ AND NEGATİF TISSUES Identification of target cells by immunohistochemical detection of covalently rearranged estradiol in rehydrated paraffin sections was presented by Jungblut and Sierralta in 1998. Localizing diffusible compounds at cellular and subcellular levels is notoriously difficult and fraught with pitfalls. Various techniques have been recommended during the past four decades. But most had to be abandoned.Estradiol is released from the binding receptor and arrested in the molecular vicinity by Mannich reaction in asetic acid and formaldehyde. In this way, the diffusion of estradiol is prevented. Estradiol can be seen in its target cells where it is fixed by using immunohistochemical technique. Nine mammary cancer tissues and three endometrial tissues for a total of twelve cases were collected in eight months by the permission of Marmara University the Faculty of Medicine Ethic Committee. All samples were submerged in 10% asetic acid and 4% formaldehyde immediately after operation. After fixation for a minimum of four hours, samples were paraffinized. Sections of 4-5 um were cut, and anti-östrodiol had was applied by using an immunohistochemical technique. Estradiol receptor was identified in the nuclei of epithelial and tumor cells of mammary cancer cases and endometria by using a classical immuhohistochemical method. Unfortunately, nuclear staining by applying anti-estradiol in the immunohistochemical studies was not realized but cytoplasmic staining was identified. VI