Tiyoredoksin redüktaz enziminin gökkuşağı alabalığı solungaç dokularından saflaştırılması ve bazı ağır metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi

Abstract

Bu çalışmada, Tioredoksin sistemi, tioredoksin redüktaz (E.C 1.6.4.5.; TrxR), tioredoksin (Trx) ve nikotinamid adenin dinükleotit fosfatından (NADPH) oluşur ve hücre büyümesine, apoptoz, antioksidan savunma, redoks sinyallemesine vb. katılır. Bu çalışmada, sitoplazmik TrxR enzimi, gökkuşağı alabalığı solungaç dokularından ısı denatürasyonu ve 2 ', 5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi teknikleri kullanılarak saflaştırılmıştır. Enzimin saflığı ve monomer moleküler ağırlığı, SDS PAGE ile belirlendi. NADPH ve 5,5 'Dithiobis (2-nitrobenzoik asit) için KM değerleri, enzimin substratları, Lineweaver-Burk grafiği ile hesaplandı. Optimom pH ve optimum iyonik şiddet değerleri sırasıyla 7.75 ve 300 mM olarak belirlenmiştir. Daha sonra Ni2+, Cu2+ ,Pb2+, Cd2+, Sr2+, Zn2+, Mg2+, Cr3+, Fe3+, Al3+ ve Ag+ metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerindeki in vitro etkileri analiz edildi. İnhibisyon etkisi gösterenler için IC50 değerleri belirlendi ve Ki değerleri Cheng Prusoff denklemi ile hesaplandı.

In the present study, Thioredoxin system is formed of thioredoxin reductase (E.C 1.6.4.5.; TrxR), thioredoxin (Trx) and nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), and participates in cell growth, apoptosis, antioxidant defense, redox signaling, etc. In this study, cytoplasmic TrxR enzyme was purified by using heat denaturation and 2',5'-ADP Sepharose 4B affinity chromatograph techniques from rainbow trout gill tissues. The purity and the monomer molecular weight of the enzyme were determined with SDS-PAGE. KM values for NADPH and 5,5'-Dithiobis (2-nitrobenzoic acid), the substrates of the enzyme were calculated by means of Lineweaver-Burk graphic. Optimal pH and optimal ionic strength values were determined as 7.75 and 300 mM, respectively. Then, in vitro effects of the Ni2+, Cu2+, Pb2+, Cd2+, Sr2+, Zn2+, Mg2+, Cr3+, Fe3+, Al3+ and Ag+ metal ions on the enzyme activity were analyzed. IC50 values were determined for the ones showing inhibition effect and their Ki values were calculated by means of Cheng-Prusoff equation.