Ağızdan aşı adayı Clostridium difficile yüzey proteini geni slpA`nın Agrobacterium tumefaciens`e aktarılması

Abstract

Clostridium difficile insanlarda antibiyotiğe bağlı ishal ve psödomembranöz enterokolit etmeni olan anaerob bir patojendir. Dünya genelinde antibiyotiğe bağlı ishal vakalarının %15-30'u C. difficile kaynaklıdır. C. difficile enfeksiyonundan korunmak için hâlihazırda herhangi bir aşı ya da tedavi bulunmamaktadır. Bağırsak epitel hücreleri, slpA proteinleri ile uyarıldığında buna karşı anti-slpA antikorlarını üretmektedir. Böylece konakçı hücrelere C. difficile'nin yapışmasının engellediği son yıllardaki çalışmalarda gösterilmiştir.Çalışmamız, bitkinin üreteceği Yüzey-Katman Proteinleri (Surface-Layer Proteins- slpA) ile C. difficile'nin insan bağırsağında kolonizasyonunu engelleyip bu etkene bağlı enfeksiyonların önlenmesini sağlamak üzerine oluşturulmuştur. Aynı zamanda yenilebilir aşı olarak kullanılabilecek transgenik bitkilerin üretilmesinde, indirekt gen aktarım etmeni olarak rekombinant Agrobacterium tumefaciens bakterisi elde edilmiştir. Bu amaçla çalışmanın birinci aşamasında, vektör olarak kullanılan A. tumefaciens'e öncül proteini sentezleyen LMW_slpA geni klonlanmıştır. Transgenik başarı, LMW_slpA geninin PZR ve sonrasında yapılan elektroforez sonucu agaroz jelde 947 baz çifti bölgede bantlar görülmüştür.

Clostridium difficile is an anaerobic bacteria that causes antibiotic-induced diarrhea and pseudomembranous enterocolitis in humans. It is responsible for 15-30 % of antibiotic-related diarrhea cases worldwide. There is currently no vaccine or treatment to prevent C. difficile infection. Recent studies have shown that anti-slpA antibodies are produced against the human intestinal epithelial cells when stimulated with slpA proteins and inhibits the adhesion of C. difficile to host cells.With the present study we aim to generate the plants that expressing slpA which prevents binding of C. difficile to intestinal epithelial cells of human. Therefore, C. difficile causing infection is obscured. Recombinant Agrobacterium tumefaciens bacteria were obtained as indirect gene transfer agent that generate transgenic plants which can be used as edible vaccines.For this purpose, in the beginning on this study, the LMW_slpA gene that synthesized the precursor protein was cloned to the cloning vector of A. tumefaciens. Transgenic success was achieved by electrophoresis of the LMW_slpA gene.