Bitkisel ürün matrikslerinde polifenolik maddelerin yüksek performanslı sıvı kromatografisi yöntemi ile tayini

Abstract

Bu çalışmada önemli polifenolik bileşiklerden olan elajik asit (EA) ve rutin'in (RUT) bitkisel ürün matrikslerinde tayini için yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) yöntemi geliştirilmiş ve valide edilmiştir. EA ve RUT'un, gıda takviye edici olarak kullanılan sambucol (kara mürver) örneklerinde, bazı pekmezlerde ve nar suyunda fenil kolonu (4,6 mm×100 mm×3 µm) kullanılarak fotodiyot dizisi dedektörü (DAD) ile 254 nm dalga boyu değerinde 18 dakika içerisinde tayini gerçekleştirilmiştir. Hareketli faz olarak A (su:metil alkol:formik asit; 88:10:2; h/h/h) ve B (su:metil alkol:formik asit; 8:90:2; h/h/h) kullanılmıştır. Akış hızı 1,0 mL/dk ve enjeksiyon hacmi 20 µL'dir. Deneylerde metil paraben ve etil paraben olmak üzere iki tane iç standart (IS) madde kullanılmıştır. Deneylerde matriks uyumlu kalibrasyon eğrisi yöntemi uygulanmıştır. EA ve RUT için yüksek korelasyon katsayıları (r2= 0,9916-0,9985) ile doğrusal grafikler elde edilmiştir. EA ve RUT için gün içi ve günler arası kesinlik deneylerinde %7,4'den küçük yüzde bağıl standart sapma (%BSS) değerleri elde edilmiştir. Geliştirilen yöntem, bitkisel ürün matrikslerine başarılı bir şekilde uygulanmıştır.

In this study, high performance liquid chromatography (HPLC) method has been developed and validated for determination of important polyphenolic compounds including ellagic acid (EA) and rutin (RUT) in the plant product matrices. EA and RUT were determined in sambucol (black elderberry) samples which used as food supplements, some molasses and pomegranate juice by using photodiode array detector (DAD) at 254 nm wavelength value within 18 minutes on a phenyl column (4.6 mm×100 mm×3 µm). A (water:methanol:formic acid; 88:10:2; v/v/v) and B (water:methanol:formic acid; 8:90:2; v/v/v) solutions were used as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and the injection volume was 20 µL, respectively. In the experiments two internal standard (IS) substances were used including methyl paraben and ethyl paraben. Matrix-matched calibration curve method was applied in the experiments. Linear graphs were obtained with high correlation coefficients (r2= 0.9916-0.9985) for EA and RUT. In intra-day and inter-day precision studies with less than 7.4% RSD% values were obtained for EA and RUT. The developed method has been successfully applied to the plant product matrices.