Rat groin flebinde eritropoetin ve iskemik ön koşullandırmanın iskemi reperfüzyon hasarına etkileri

Abstract

Rekombinant insan eritropoetininin (rhEpo) ve iskemik önkoşullandırmanın iskemi/reperfüzyon (I/R) hasarına karşı koruyucu etkileri iyi bilinmektedir. Bu çalışmada rat groin flebinde I/R ve sistemik rhEpo'in beraber ve tek tek etkileri değerlendirilmiş ve karşılaştırılmıştır. Yetmiş dört Wistar tipi rat rastgele beş gruba ayrıldı. Grup 1 (n=10); sham grubundan flep kaldırıldı. Grup 2 (n=16); groin deri flebi kaldırıldı ve 8 saat iskemi uygulandı. Grup 3 (n=16); iskemik önkoşullandırma 3 siklus olmak üzere 10 dakika iskemi, 10 dakika reperfüzyon olarak uygulandı ve ardından aynı iskemi prosedürü uygulandı. Grup 4 (n=16); Aynı iskemi prosedürü uygulandı; reperfüzyondan 30 dakika önce tek doz rhEpo (5000 IU/kg) intraperitoneal yoldan enjekte edildi. Group 5 (n=16); iskemik önkoşullandırma ve rhEpo prosedürleri uygulandı, ardından aynı iskemi prosedürü uygulandı. Ameliyat sonrası 24'üncü saatte dokuda myeloperoksidaz (MPO), malondialdehit (MDA), nitrik oksit (NO) değerleri ölçüldü, inflamasyon bulguları değerlendirildi. Ameliyat sonrası 10'uncu günde flep sağ kalım oranı, anjiyogenezis, apopitoz ve hematokrit (htc) seviyeleri değerlendirildi. Doku MDA seviyeleri karşılaştırıldığında grup 5'in grup 2 (p<0,043) ve grup 3'ten (p<0,042) anlamlı derecede farklı ve düşük olduğu görüldü. Doku NO seviyeleri karşılaştırıldığında grup3'ün (p<0,040), grup 4`ün (p<0,003) ve grup 5'in (p<0,001) grup 2'den anlamlı derecede yüksek olduğu görüldü. Anjiyogenezis karşılaştırıldığında grup 5'in grup 2 (p=0,001), grup 3 (p=0,001) ve grup 4'ten (p=0,003), grup 4'ün grup 2'den (p=0,045) anlamlı derecede yüksek olduğu görüldü. Grup 5 (p<0,05), ve grup 4'ün (p<0,05), grup 2`den anlamlı derecede düşük apopitotik hücre sayısına sahip oldukları görüldü. Flep sağ kalım oranları değerlendirildiğinde grup 3'ün (p= 0,003), grup 4'ün (p< 0,001) ve grup 5'in (p<0,001) grup 2'den, grup 5'in grup 3'ten (p= 0,001) anlamlı derecede farklı ve yüksek sağ kalım oranına sahip olduğu görüldü. Sonuçlarımız iskemik önkoşullandırma ve sistemik rhEpo'in beraber kullanımının I/R hasarını azaltmada anlamlı derecede efektif olduğunu göstermiştir

The tissue protective potentials of recombinant human erythropoietin (rhEpo) and ischemic preconditioning (IP) against ischemia/reperfusion (I/R)-induced injury are well known. In this study, the combined and individual effects of IP and systemic rhEpo on rat groin flaps were evaluated and compared clinically and histologically. Seventy-four Wistar rats were randomly divided into five groups. Group 1 (n=10) the sham-operated animals underwent flap elevation. Group 2 (n=16); a groin skin flap was elevated and an 8-hour ischemic insult was achieved. Group 3 (n=16); IP was performed by 3 episodes of 10 min femoral artery occlusion followed by 10 min reperfusion and then same ischemia procedure was performed. Group 4 (n=16) the same ischemia procedure was performed, thirty minutes before reperfusion; single-dose rhEpo (5000 IU/kg) was injected through the intraperitoneal route. Group 5 (n=16) the same IP and rhEpo procedures was performed. At 24 hours postoperatively, tissue myeloperoxidase (MPO), malondialdehyde (MDA), nitric oxide (NO) values and histologic finding of inflammation were evaluated. At day 10 postoperatively, flap survival rate, angiogenesis, apoptosis and change in hematocrit (htc) level were evaluated. The flap tissue MDA value in the group 5 was significantly lower compared with the group 2 (p<0,043) and group 3 (p<0,042). NO value in the group 3 (p<0,040), group 4 (p<0,003) and group 5 (p<0,001) was significantly higher compared with the group 2. Angiogenesis in the group 5 was significantly higher compared with the grup 2 (p=0,001), group 3 (p=0,001), group 4 (p=0,003) and group 4 was significantly higher compared with the group 2 (p=0,045). The apopitotic cell in the group 5 (p<0,05) and group 4 (p<0,05) was significantly lower compared with the grup 2. In the group grup 3 (p= 0,003), grup 4 (p< 0,001) and group 5 (p<0,001) the flap survival was significantly higher compared with the grup 2, and the group 5 was significantly higher compared with the grup 3 (p= 0,001). Our results show that combination of IP and rhEpo is significantly effective in reducing I/R injury.