Fungemi etkeni Candida Albicans ve non-albicans ayrımında kullanılan germ tüp deney süresinin azaltılmasında yöntemlerin karşılaştırmalı olarak araştırılması

Abstract

Candida albicans ve non-albicans türlerinin ayrımında kullanılan germ tüp (GT) deneyinin pozitif reaksiyon verme süresinin azaltılmasına yönelik araştırmaların yapılması için farklı deney ortamları karşılaştırılmış ve benzer sonuçların fungemili hastaların kan kültürlerinden alınan örneklerle de elde edilip edilemeyeceğinin araştırılması amaçlanmıştır.Mersin Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Laboratuvarı'na Mart-Ağustos 2009 tarihleri arasında gönderilen, Gram boyama ile maya pozitif saptanmış 105 kan kültür şişesi ile çeşitli klinik örneklerden izole edilen 73 Candida suşu çalışma kapsamına alınmıştır. Hazırlanan 21 farklı deney ortamında, klinik izolat kolonilerinden hazırlanan maya süspansiyonları ve maya pozitif BACTEC şişelerinden doğrudan inokülasyonlar 37oC'deki inkübasyonları sırasında 15'er dakika (dk) arayla mikroskopik olarak incelenmiştir.KDS-MUS (1 kan donör serumu+3 mısırunlu sıvı besiyeri) 45. dk'da %53,33, 60. dk'da %90 oranında, taze donmuş plazma ve kan donör serumu ise 60. dk'dan itibaren %60'ın üzerinde GT pozitifliği veren deney ortamları olarak belirlenmiştir.Mısırunlu sıvı besiyerine %25 taze donmuş plazma ve kan donör serumu ilavesinin GT oluşturmada başarı oranını arttırdığı gözlenmiştir. Sabouraud Dekstroz, Mueller-Hinton ve mısırunlu sıvı besiyerleri ile biyolojik ürünler olan seroloji serumu, taze donmuş plazma ve kan donör serumuna %10 Tween80 veya safra ilavesinin GT oluşturmada başarı oranını arttırmadığı saptanmıştır.Maya pozitif kan kültür şişelerinin Gram boyama sonuçları ile KDS besiyerinde GT oluşum sürelerinin birlikte değerlendirilmesiyle Candida türlerinden özellikle C. albicans'ın ayrımında daha da hızlı tanıya gidilebileceği olanaklı gözükmektedir.

The aim of this study is to compare different test media in terms of reducing the time of positive reaction by germ tube (GT) experiment method used for differentiation Candida albicans and non-albicans fungemia agents and to detect the performance of these methods on blood culture samples of fungemic patients.Between March-August 2009, 105 yeast positive blood culture bottles detected by Gram staining and 73 clinical Candida isolates which were collected from Mersin University Faculty of Medicine Department of Medical Microbiology Laboratory were included into this study. Yeast suspensions prepared from colonies of clinical isolates and yeast positive BACTEC blood culture bottles were inoculated directly on to 21 different test media, incubated at 37oC and examined microscopicaly in every 15 minutes.At the 45th and 60th minutes, positive ratio was 53,33% and 90% respectively for the test medium prepared from blood donor sera+corn meal broth (1:3) and it was determined as the most successful media in detecting GT positivity, after 60th minutes, GT positivity ratio was 60% for the test medium prepared from freshly frozen plasma and blood donor sera.Addition of 25% freshly frozen plasma and blood donor sera into cornmeal broth increased the success rate in GT formation whereas addition of 10% Tween 80 or bile into Sabouraud Dextrose, Mueller-Hinton and cornmeal broth media with biological products like serology sera, freshly frozen plasma or blood donor sera did not increased the success rate in GT formation.It seems to be possible that differentiation of Candida species, especially for C. albicans, evaluation of both Gram stain results and GT formation times in blood donor sera medium results in yeast positive blood culture bottles would provide a rapid diagnosis of fungemia.