Farelerde puberte sonrası nikotin maruziyetinin spermatogonyal farklılaşma üzerine olası etkilerinin immün işaretleme yöntemleriyle incelenmesi

Abstract

Erkeklerde puberte sonrası dönemdeki erken yaşlarda sigara kullanımı çeşitli derecelerde üreme bozukluklarına neden olabilmektedir. Literatürde, sigaranın temel toksik komponenti olan nikotinin erkek üreme biyolojisi üzerine olan etkilerini moleküler düzeyde inceleyen çok az çalışma bulunmaktadır. Bu çalışmada, farelerde puberte sonrasına denk gelen postnatal 60 ve 90. günler arasındaki bir aylık süreçteki nikotin maruziyetinin spermatogonyal farklılaşma sürecini üzerine olan etkisinin morfolojik ve immünohistokimyasal olarak incelenmesi amaçlanmıştır.Çalışmamızda 63 adet 60 günlük C57BL6J soy erkek fare P90, P105 ve P120'de kontrol, sham ve nikotin grupları olmak üzere toplam 9 gruba (n=7/grup) ayrılmıştır. Her bir yaştaki nikotin grubuna P60-90 arasında 3mg/kg dozunda nikotin subkutan olarak enjekte edildi. Sham grubuna serum fizyolojik sıvısı aynı yöntemle verildi. Kontrol grubu farelere ise kesim günlerine kadar hiçbir işlem uygulanmadı. Her yaşa ait farelerin seminifer tübül çapları ve germinal epitel kalınlıkları morfolojik olarak değerlendirildi. Elde edilen testis dokularındaki GDNF, Oct-4 ve C-kit immünohistokimyasal protein ekspresyonları semikantitatif olarak değerlendirildi.Morfolojik değerlendirmelerde P90, 105 ve 120 nikotin gruplarına ait farelerin kontrol ve sham gruplarına kıyasla tübül çapı ve germinal epitel kalınlığı parametrelerinde istatistiksel olarak anlamlı azalmanın olduğu gözlendi. İmmünohistokimyasal değerlendirmelerde ise tüm yaşlardaki nikotin grubu GDNF, C-kit Oct-4 protein ekspresyonlarının kontrol ve sham gruplarına kıyasla istatistiksel olarak anlamlı düzeyde azaldığı semikantitatif olarak gösterildi. Kontrol ve sham grupları arasında bu değerler açısından anlamlı düzeyde farklılık tespit edilmedi.Sonuç olarak, elde edilen verilerin hem spermatogonyal farklılaşma çalışmalarına hem de nikotine bağlı üreme bozukluklarının patogenez mekanizmalarına ışık tutacağı düşünüldü.Anahtar Kelimeler: Nikotin maruziyeti, spermatogonyal farklılaşma, erkek üremesi

ABSTRACTThe Immunohistochemical Evaluation of the Effects of After-Puberty Nicotine Exposure on the Spermatogonial Differentiation of Mice.It's known that postpuberty smoking in men can lead to breeding problems. The existing literature has still lack of sufficient knowledge on the effects of nicotine exposure on the male breeding. Presently, it's aimed to investigate the effects of nicotine exposure during P60-90 just after the termination of the puberty on the spermatogonial differentiation in mice. A number of 63 male C57BL6/J mice at the age of P60 were used. Our experimental design consist of 3 age groups (P90, P105 and P120) and main groups as Naive Control, Sham and Nicotine groups (n=7/group). By sub-cutaneus injections, a dose of 3mg/kg/body weight nicotine were given to the nicotine groups of mice. Paralelly, an iso-volumetric saline solution was also admistered to a group of body weight matched mice designated as the sham group. Naive controls were kept lack of any procedures until the harvesting days. Each group of mice testes were analysed for the body and testes weights, the diameter of and thickness of seminiferous tubules and expressions of GDNF, Oct-4 and C-kit proteins were evaluated.By the morphological values of evaluated seminiferous tubules of nicotine groups as compared to the controls were observed as at lower degrees. A similar trend was also observed in terms of the immunohistochemical assesments of GDNF, Oct-4 and C-kit protein expressions. On the other hand, no significant difference was observed between the two controls.In conclusion, we postulate that the findings of the present study will illuminate the near future studies for understading the spermatogonial differention.Key Words: Nicotine Exposure, Spermatogonial Differentation, Male Breeding