Adli tıpta vücut sıvılarının tanımlanmasında biyolojik marker olarak mikroRNA`nın kullanımı

Abstract

Adli uygulamalarda vücut sıvılarının tanımlanması olayın aydınlanmasınakatkıda bulunması bakımından önemlidir. Son zamanlarda vücut sıvılarınıntayininde RNA analizine dayalı metotlar üzerine çalışmalar yapılmaktadır.Yapılan bu çalışmalarda mikroRNA ekspresyon analizinin vücut sıvılarınıntanımlanmasında hassas ve spesifik bir yöntem olduğu öne sürülmektedir. Buçalışmada belirlenen 11 hedef biyomarker adayı mikroRNA'nın periferik kansemen-tükürük-menstruel kanda ekspresyon analizi yapılarak miRNA'larınvücut sıvılarının tayininde kullanılabilirliği ve biyolojik sıvılar için bir markerdeğerlerinin olup olmadığının araştırılması amaçlanmıştır.Çalışmamıza Mersin Üniversitesi Tıp Fakültesi Adli Tıp Anabilim Dalı'ndayazılı ve sözlü onamı alınan 10 kadın ve 10 erkek birey olmak üzere toplamsağlıklı 20 bireyden alınan periferik kan, tükürük, semen ve menstruel kanörnekleri dahil edildi. Alınan örneklerde hsa-miR-451, hsa-miR-144, hsa-miR106a, hsa-miR-10b, hsa-miR-891a, hsa-miR135a, hsa-miR-96, hsa-miR-203,hsa-miR-205, hsa-miR-412 ve hsa-miR-214 ekspresyon düzeyleri analiz edildi.Analiz edilen 11 miRNA'nın ekpresyon seviyeleri farklı vücut sıvıları arasındaistatiksel olarak anlamlı farklılık gösterdi(p<0,05). Periferik kanın tanımlanmasıiçin hsa-miR-451a'nın artmış ekpresyon düzeylerinin, tükürük sıvısınıntanımlanması için hsa-miR-203a-3p ve hsa-miR-205-5p'nin artmış ekspresyondüzeylerinin, semen sıvısının tanımlanması için hsa-miR-10b-5p, hsa-miR891a-5p ve hsa-miR-135a-5p'nin artmış ekspresyon düzeylerinin, menstruelkan tanımlanması için hsa-miR-412-3pve hsa-miR-214-3p'nin azalmışekpresyon düzeylerinin istatiksel olarak anlamlı olduğu görüldü(p<0,001).Ayrıca vücut sıvılarının tanımlanması için aday olarak seçilen miRNA'lardanhsa-miR-451a'nın periferik kan için, hsa-miR-203a-3p'nın tükürük için, hsa-miR891a'nın semen için diğer aday miRNA'lara kıyasla oldukça yüksek ayırt ediciözelliğe sahip olduğu ve bu üç miRNA'nın adli uygulamalarda kullanılabileceken güçlü biyomarkerlar olduğu belirlendi.Çalışmamızın sonuçları; olay yerlerinde sıklıkla karşılaşılabilecekperiferik kan, semen, tükürük ve menstruel kan gibi vücut sıvılarında seçilenaday miRNA biyobelirteçlerinin istatiksel olarak anlamlı düzeyde farklıekpresyon seviyesi gösterdiğini, bu nedenle de vücut sıvılarının 6tanımlanmasında miRNA'ların, adli laboratuarların rutin uygulamalarında yenibir yöntem olarak kullanımını desteklemektedir.

Identifying body fluids in forensic applications is important for contributingrevelation of cases. In recent years, there have been studies on method basedon RNA analysis for identification of body fluids. It has been proposed thatmicroRNA expression analysis is a sensitive and specific method foridentification of body fluids in these conducted studies. In this study, evaluatingwhether chosen 11 target biomarker candidate microRNAs have availability andmarker value for identification of body fluids and for biologic fluids by performingexpression analysis on peripheral blood-semen-saliva-menstural blood; wasaimed.Peripheral blood, saliva, semen and menstural blood samples of a totalof 20 healthy subjects (consisted of 10 male and 10 female individuals) who hadgiven written and verbal consent in Mersin University Faculty of Medicine,Department of Forensic Science were included in this study. Expression levelsof hsa-miR-451, hsa-miR-144, hsa-miR-106a, hsa-miR-10b, hsa-miR-891a,hsa-miR135a, hsa-miR-96, hsa-miR-203, hsa-miR-205, hsa-miR-412 and hsamiR-214 in collected samples were analysed. There was statistically significantdifference between measured 11 miRNA expression levels in different bodyfluids (p<0,05). Increased levels of hsa-miR-451a, hsa-miR-203a-3p and hsamiR-205-5p, hsa-miR-10b-5p and hsa-miR-891a-5p and hsa-miR-135a-5p werefound to be statistically significant for identification of peripheral blood, saliva,semen; respectively; whereas decreased expression levels of hsa-miR-412-3pand hsa-miR-214-3p were found to be statistically significant for identification ofmenstural blood (p<0,001). In addition, hsa-miR-451a, hsa-miR-203a-3p andhsa-miR-891a among all other chosen miRNAs for identification of body fluidswere found to have quite higher differentiating quality than other candidatemiRNAs for identification of peripheral blood, saliva and semen; respectively;and these three miRNAs were identified as most potent biomarkers which canbe used in forensic applications.Results of our study supports the utility of miRNAs as a new method inroutine applications of forensic laboratories in identification of body fluids due to 8statistically significantly different expression levels of chosen miRNA biomarkersin peripheral blood, semen, saliva and menstural blood which can be frequentlyseen during crime scene investigations.