Search for ATG5 interacting proteins by using yeast two hybrid system

Abstract

Otofaji, iki veya çok zardan oluşan kesecikler tarafından paketlenen bir miktar sitoplazma ile organelin hücrenin lizozomal sistemine iletimi ve böylece sindirilmesi olarak karakterize edilir. Bu hücresel olgunun protein parçalanması ve organel döngüsünü de içeren birçok fizyolojik fonksiyonu vardır.Artan kanıtlar gösteriyor ki, otofaji mekanizması amino asit yokluğu ve gıda eksikliği gibi stres koşullarında apoptotik olmayan `otofajik hücre ölümü' olarak adlandırılan, alternatif bir mekanizma olarak çalışmaktadır. Bazı durumlarda otofaji ve apoptoz pozitif veya negatif olarak birbirleriyle bağlantı içinde gözükmektedirler .Otofaji proteini olan Atg5 otofagozmal zar yapısında kritik rol oynamaktadır. Birikmiş bilgiler gösterdi ki, Atg5 otofajide anahtar proteindir ve fazla miktardaki expresyonu memeli hücrelerinde otofajiyi tetiklemek için yeterlidir. Bu nedenle biz Atg5'in fonksiyonunu düzenleyen moleküler pathwayları karakterize etmeye karar verdik. Bu amaçla, Atg5 ile ilişkiye giren ve potensiyel olarak onu düzenleyen proteinleri bulmak için maya ikili hibrit yöntemini kullandık. Bizim screen sonucumuz Atg5'in otofajiye bağımlı birçok sinyal pathwayinde bağlantı noktası olabileceğini gösterdi.

Autophagy is characterized by sequestration a bulk of cytoplasm and organelles in double or multimembrane autophagic vesicles, and their delivery to and subsequent degradation by the cell's own lysosomal system. This cellular phenomenon has multiple physiological functions including protein degradation and organelle turnover.Increasing lines of evidence indicate that autophagic machinery may be recruited by an alternative, caspase-independent and non-apoptotic form of programmed cell death named `autophagic cell death`. In some settings autophagy and apoptosis seem to be interconnected positively or negatively.Atg5 is an autophagy protein playing a crucial role in autophagasomal membrane formation. Accumulating data indicate that Atg5 is key molecule in autophagy and the more overexpression of Atg5 is sufficient to induce autophagy in mammalian cells. Therefore, we decided to characterize molecular pathways regulating Atg5 function. For this purpose, we used the yeast two hybrid system to discover proteins interacting with and potentially regulating Atg5. The results of this screen revealed that Atg5 might be a conversion point for various signaling pathways-related to autophagy.