Kemik iliği nakli hastalarında DNA parmak izi yöntemiyle kimerizmin belirlenmesi

Abstract

-65- VI. ÖZET İnsan DNA'sında genomun %70 kadarı tek kopya geri kalan %20-30'u ise tekrarlayan dizilerden oluşmuştur. Büyük ölçüde tekrarlayan diziler birkaç baz çiftinden oluşan motifleri içeren mikrosatellitler ve daha uzun birimleri içeren minisatellitlerdir. İnsan genomunda yer alan bu tekrarlamalı dizilerden oluşturulmuş problar kullanılarak birçok ileri derecede değişken bölge eşzamanlı olarak tanımlanabilmiş ve kişiye özgül DNA parmak izi analizi gerçekleştirilmiştir. DNA parmak izi tekniği adli tıpta kimlik tesbitinde, ikizlerin tek veya çift yumurta ikizi olmalarının belirlenmesinde, akrabalık ve babalık tayininde, infeksiyonlarda etken patojenlerin tanımlanmasında, türler arası polimorfizmin belirlenmesinde, Huntington hastalığı, Duchenne kas distrofisi gibi birçok kalıtsal hastalıktan sorumlu genleri lokalize etmeye yarayan bağlantı analizlerinde ve kemik iliği nakli hastalarının izlenmesinde kullanılmaktadır. Bu çalışmada kemik iliği nakli uygulanan hastalardan nakil öncesi ve sonrası ve vericilerinden elde edilen DNA'lar, Hinf I ve Alu I restriksiyon enzimleriyle kesildikten sonra Southern blot yöntemiyle membrana aktarıldı. 5' ucundan Digoksigeninle işaretlenmiş basit tekrar problarıyla hibridleştirildi. 12 hastadan 3 tanesinde (%25) graft rejeksiyonu ve relapsta önemli bir risk faktörü olabileceği söylenen karışık kimerizmin gelişmiş olduğu, diğerlerinin tam kimerik oldukları tesbit edildi.

-66- VII. SUMMARY Human genomic DNA is composed of approximately 70% single copy and 20-30% repetetive sequences. Highly repetetive sequences are microsatellites which contain a few base pairs and minisatellites which contain longer units. Many hipervariable regions are detected simultaneously using probes composed of these repetetive sequences in human genom and an individual-specific DNA 'Fingerprint' analysis is performed. DNA Fingerprinting can be used in identity testing in forensic medicine, determination of zygosity in twins, detecting the DNA changes in tumours, determination of paternity, defining the pathogenic agents in infectious diseases, determination of interspecies polymorphism, linkage analysis used to localize the defective genes in hereditary diseases such as Huntington disease, Duchenne musculer distrophy and monitoring the course of bone marrow transplantation. In this study the DNA samples from bone marrow transplantation patients obtained before and after the procedure and from the donors were digested with restriction endonucleases Hinf I and Au I. The resulting products were transferred to membranes Southern blotting and hybridized with simple repeat probes which were labeled at their 5' ends with digoxigenin. Mixed chimerism which is assumed to be an important risk factor in predicting graft rejection and relapse was detected in three of the twele (25%) bone marrow transplants. The others were complete chimerics.