Bir yada birden fazla tür içeren çeşitli gram olumsuz bakteri süspansiyonlarına karşı tavşanlarda elde edilen antiserumların saf lipopolisakkaritler ile çapraz IgG çapraz reaktivitelerinin araştırılması

Abstract

ÖZET: On adet 5 aylık 2 kg ağırlığındaki beyaz Yeni Zelanda tavşanı anti-lipopolisakkarit IgG elde edilmesi amacı ile bağışıklanmıştır. Dört farklı Pseudomonas aeruginosa (ED 1009,1010,1011,1012) ve üç farklı Escherichia coli (055,111,91) serotipi bağışıklama amacı ile kullanılmıştır. Bu seratiplerin bakteri hücre duvarı fraksiyonları yoğunlaştırılarak inaktif süspansiyonları hazırlanmıştır. Tek bakterili ve çok bakterili süspansiyonların çapraz reaktiviteleri biribirleri ile karşılaştırılmalı olarak araştırılmıştır. IgG yanıtı için 2., 6., 13. ve 21. günlerde toplam 4 dozda ( ilk 2 doz 0.1 mi ve son iki doz 1.0 mi tümü damar yolundan) birincil ve ikincil bağışıklama takvimi tamamlanmıştır. Çapraz reaktivite çalışmaları saf LPS ( SigmaR ) preparatları ile kaplanmış olan 96 çukurcuklu GreinerR yüksek bağlama kapasiteli mikro-ELISA plakları kullanılarak yapılmıştır. Pseudomonas aeruginosa serotip HD 1009 a karşı anti-endotoksin (IgG) aktivitesinin en yüksek titrelerde ve en geniş anti LPS spektrumunda olduğu; ardından da ED 1010 ve 1012 numaraların geldiği saptanmıştır. Çoklu bakteri karışımlarının bağışıklayıcı potensinin içerisinde bulunan her bir bakteriye ilişkin sonuçlar ile sınırlı olduğu; başka bir deyişle bir LPS preparatının diğerine adjuvan etkisinin önemsiz olduğu ve hatta mekanizması bu çalışmada gösterilemeyen bir şekilde daha çok bir baskılamanın ve bazı durumlarda da toplam etkinin olumlu yönde etkilenmesinin olabileceği saptanmıştır. Pseudomonas aeruginosa serotip ED 1009, 1010 ve 1012 immün antiserumlarına ilişkin sonuçlar yüksek titrelerde geniş gram olumsuz çapraz reaktivitesi olan anti-Pseudomonal IgG nin elde edilebilir olduğunu göstermiş ve bu yönde yapılacak daha kapsandı çapraz reaktivite, biyokimyasal ve immünolojik çalışmaları cesaretlendirmiştir. Kullanılan E. coli serotipleri arasında ise 0:55 serotipinin daha immunodominant bir serotip olduğu saptanmıştır. Elde edilen antiserumların LPS 'in derin fraksiyonunu temsil eden katı faz antijenlerine karşı reaktivitesinin yüzeyel antijenlerine karşı olduğundan genellikle çok daha zayıf olduğu da bulunmuştur.

VHI.SUMMARY: Ten New Zaeland white rabbits 5 months of age and weighing 2 kg were immunized for producing anti-lipopolysaccharide IgG antibodies.Four different Pseudomonas aeruginosa (ÖD 1009,1010,101 1,1012) and three different Escherichia coli (055,01 1 1,091) serotypes were used for immunization. Cell wall fraction condensed, inactive suspensions of these serotypes were prepared. The cross reactivity differences of monobacterial and polybacterial suspensions were studied comperatively with each other. Totally four dose (2+2) primary and secondary (first two doses 0.1 ml and the last two doses 1.0 ml by the intravenous route ) immunization schedule was performed in days 2, 6, 13 and 21 for the IgG response. Cross reactivity studies were made by using 96 well GreinerR high binding capacity micro-ELISA plates coated with pure LPS ( SigmaR ) preparations. Anti- endotoxin IgG activity of the antiserum produced against Pseudomonas aeruginosa IID 1009 were found in the highest titers and widest anti-LPS spectrum followed by HD numbers 1010 and 1012. Immunizing potency of the polybacterial suspensions were found to be limited by the results of the each bacterial suspension singly, in other words adjuvant effect of one LPS to the others was not worthy but also a possibility of mostly a supression and sometimes the augmentation of the total effect by any mechanism which could not be demonstrated in this study. Results of the Pseudomonas aeruginosa 1009, 1010 and 1012 immune antiserum demonstrated the possibility of producing anti-Pseudomonal IgG having wide spectrum of gram negative cross-reactivity in high titers, and supports the encouregment of more detailed cross reactivity, biochemical and immunologic studies in this manner. Serotype 0:55 was detected to be the most immunodominant serotype among the E. coli strains used. The reactivities of the antisera against the solid phase antigens representing the deeper fractions of LPS were also found to be much weaker than the reactivity to the superficial elements. 75