Sürekli ayaktan periton diyalizi hastalarında peritonit erken tanısı için reaktif oksijen türlerinin kemilüminesans yöntemi ile ölçümü

Abstract

49 ÖZET Sürekli ayaktan periton diyalizi (CAPD) son dönem böbrek yetmezliği tedavisinde etkin olarak kullanılmaktadır. CAPD sırasında görülen en önemli komplikasyon peritonittir. Peritonit sırasında konağın antimikrobial cevabında polimorfonükleer lökositler önemlidir.Fagositoz sırasında PMN'in oksijen alımında hızlı bir artma meydana gelir ve solunumsal patlama olarak adlandırılır. Solunumsal patlama sırasında oluşan süperoksit radikali direkt olarak veya ara ürünlere dönüşerek bakterisidal etki gösterir ve aktive olan PMN'lerden kemiluminesans oluşur.Bu nedenle, kemiluminesans ölçümleri PML'in oksidatif potansiyellerinin ve antimikrobial etkilerinin hassas bir göstergesidir. CAPD hastalarında enfeksiyon riskinin yüksek olması nedeniyle periton diyalizi sıvılarından kemiluminesans ölçümü yaptık. Nefroloji Bilim Dalı CAPD polikliniğince takip edilen hastalar (n=55) çalışmaya dahil edilmiştir. Enfekte olmayan ve akut peritonit bulguları olan hastaların diyalizatlan alındı. Peritonit tanısı klinik bulgular, diyalizat lökosit sayısı ve kültür sonuçlan değerlendirilerek konuldu. Sintilasyon sayacında reaktif oksijen türleri (ROT), luminol( hidroksil radikali, hidrojen peroksit, hipoklorit ve peroksinitrit) veya lusigenin (süperoksit radikali) arttırılmış kemiluminesans oluşumu ile tespit edildi. Her vial 60 dakika boyunca bir dakika aralıklarla sayıldı ve bazal sayım değerleri çıkarıldıktan sonra maksimum kemiluminesans olarak ifade edildi. Farklı türlerin luminol CL etkisi sodyum azid, DMSO, katalaz gibi tutucular ve baskılayıcılar eklenerek hipokloröz, hidroksil, ve hidrojen peroksit türlerinin katkıları yüzde cinsinden belirlendi. Peritonitii hastalarda luminol ve lusigenin CL değerleri enfekte olmayan gruba göre daha yüksek bulunmuştur. Hastalar belirli aralıklarla takip edilmiş ve peritonitii hastalarda antibiyotik tedavisine verilen cevapla CL ölçümlerinin azaldığı tespit edilmiştir. Sonuçlarımız CL ölçümlerinin enfeksiyonun erken tanısında ve tedavinin süresi ve etkinliğinin tespitinde kullanılabileceğini göstermiştir.

50 SUMMARY Continuous ambulatory peritoneal dialysis (CAPD) is now a widely accepted treatment for end-stage renal failure. However, the high incidence of peritonitis has been a major problem. Polymorphonuclear leucocytes (PMN) play an important role in peritonitis. During phagocytosis PMN undergoes a striking increase in oxidative metabolism known as the respiratory burst. Superoxide anion produced during the burst is bactericidal either directly or as an intermediate. In addition, stimulated PMN's emit light as chemiluminescence. Chemiluminescence is thus a sensitive measure of PMN oxidative potential and correlates well with antimicrobial activity. In view of the increased susceptibility to infection observed in patients on CAPD, we have studied chemiluminescence formation in peritoneal fluids from CAPD patients. Patients (n=55) attending the Nephrology outpatient clinic were included in the study. CAPD fluids were collected from both non-infected patients and those presenting with acute peritonitis. Peritonitis was diagnosed on the basis of anamnesis, clinical symptoms and by dialysate leukocyte count. Reactive oxygen species (ROS) formation was measured as luminol (for hydroxyl radical, hydrogen peroxide, hypochlorite, and peroxynitrites) or lucigenin (for superoxide radical) enhanced CL in fresh specimens using a scintillation counter. Each vial was observed continuously for 60 minutes with, one minute interval. After subtracting the appropriate control values peak luminescence was expressed as counts per minute (cpm) per mL. Further quantitation of different species in luminol chemiluminescence was performed by inhibitors like sodium azide, DMSO, catalase and contribution of hypochlorite, OH, H202 was determined, respectively. Luminol and lucigenin enhanced CL of peritoneal fluids was higher in CAPD patients with infection compared to those without infection.. Patients were followed at regular intervals weekly and chemiluminescence measurements were considerably suppressed under antibiotic treatment. Our results show that chemiluminescence measurements can be used as an early marker for the presence of infection in CAPD patients. In addition, decisions on treatment effectivity and duration can be easily made if chemiluminescence values are considered. 50