Radyasyonun kemik iliği ve CD 34+ hücreler üzerine olan olumsuz etkisinin önlenmesinde Amifostine`nin rolü (Ex-Vivo çalışma)

Abstract

102 7- ÖZET Amifostine (WR-2721), kemoterapötiklerin ve radyasyonun olumsuz etkisinden hematopetik hücreleri koruyan sitoprotektif bir ajandır. İlaç bu koruyucu etkisini, sadece normal hücreler üzerinde göstermekte ancak kemoterapötiklerin ve radyasyonun malign hücreler üzerine olan etkisine engel olmamaktadır. Bu çalışmada, amifostine (WR-2721)'nin kemik iliği ve CD34+ hücreler üzerine olan radyoprotektan etkinliği test edildi. Bu amaçla, sağlıklı bireylerden alınan kemik iliği örnekleri, mononükleer hücre izolasyonunu takiben 4 ayrı plağa dağıtıldı. Plaktaki kuyucuklar iki gruba ayrılarak, gruplardan biri 3mg/mL amifostine (WR-2721) ile 15 dakika inkübe edildi. Plaklardan biri kontrol olarak ayrılıp diğer üç plak, Co60 kullanılarak sırası ile 2500, 5000 ve 10000 cGy ile irradiye edildi. Irradyasyondan önce ve 12 saat sonra tüm kuyucuklardaki örneklerden hücre sayımı, canlılık, akım sitometride hücre siklus analizi, proliferatif indeks, CD34* hücre yüzdesi, akım sitometrik ve DNA fragmantasyon ve agaroz jell elektroforez yöntemleri ile apoptosis tayini ve `colony assay` çalışıldı.103 Bulgularımız, amifostine (WR-2721)'nin, radyasyona bağlı canlı hücre kaybını engellediğini, CD34* hücre yüzdesinde artışa neden olduğunu, miks koloni oluşumunu koruduğunu ve 2.500 cGy radyasyon dozunda etkili ve güvenli bir `sitoprotektan` olabileceğini göstermektedir.

104 8- SUMMARY Amifostine (WR-2721) is a cytoprotective agent that amoliaretes the toxicities of chemotherapeutic agents and irradiation on bone marrow cells. It is known to protect the normal tissues against the toxic effects of chemotherapeutic agents and radiation while preserving the antitumor effects of these therapies. The aim of this study was to evaluate the protective effect of amifostine (WR- 2721) on the bone marrow and CD34+ cells by testing the effect of radiation on the mononuclear cells with or without the presence of amifostine in healthy volunteers. Samples of bone marrow cells were divided into the wells of four separate plaques and half of the samples were incubated with 3 mg/mL amifostine (WR-2721) for 15 minutes. One of the plaques was selected as a control and the others were irradiated with a dose of 2.500, 5.000 and 10.000 cGy. The leucocyte count, viability of the cells, cell cycle analysis, proliferative index, percentage of CD34+ cells, apoptosis by using flow cytometry and DNA fragmantation and agarose gel electrophoresis, and mixed colony assay were studied prior to and 12 hours following the irradiation.105 Amifostine lead to an elevation in the proportion of CD34* hematopoietic cells, and protected the mixed CFU colony formation and viable hematopoietic cells from irradiation at a single dose of 2.500 cGy.