İnvitro fertilizasyon hastalarından elde edilen granuloza hücrelerine curcumin in in vitro etkisi

Abstract

Bu çalışmada, polikistik over sendromuna (PKOS) sahip in vitro fertilizasyon (IVF) hastaları (PKG) ile ovaryen sağlığı yerinde olan IVF hastalarının (HG) granuloza hücrelerineCurcuma longa bitki molekülü olan kurkumin uygulandığında, hücrelerin canlılık, proliferasyon ve apoptoz üzerindeki etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmada, Ota Jinemed Hastanesi Tüp Bebek Merkezi'nden 10 PKG ve 10 HG olmak üzere toplam 20 hastadan alınan oositlerden elde edilen granuloza hücreleri sırasıyla; hücrelerin canlılık oranlarının saptanması amacıyla Tripan mavisi boyaması, hücrelerin proliferatif kapasitelerinin ve metabolik aktivite düzeylerinin MTT yöntemiyle saptanması, akridin turuncusu/etidyum bromür boyamasıyla apoptotik hücrelerin oranının floresan mikroskopta sayım yapılarak incelenmesi işlemleri uygulanmıştır. Elde edilen bulgular ışığında izlenen istatistiksel analiz, tek yönlü ANOVA ve Tukey çoklu karşılaştırma testi ile yapılmıştır.24 saatlik inkübasyonunda HG grubunda, 1µg/mL Kurkumin konsantrasyonunun hücre ölümünü geciktirerek koruyucu etki yaptığı, yüksek konsantrasyonların toksik etkiye neden olmadığı, canlılık oranının %100'e yakın olduğu tespit edilmiştir. Öte yandan aynı koşulların PKG grubundaki granuloza hücreleri üzerinde farklı apoptotik / nektorik etkilere sahip olduğu belirlenmiştir.1 µg/mL Kurkumin inkübasyonunda PKG grubu granuloza hücrelerinin canlılığının istatistiksel olarak P < 0.05 düzeyinde anlamlı derecede azaldığı, yüksek doz 100 µg/mL Kurkumin inkübasyonunda PKG grubu granuloza hücrelerinin canlılığının anlamlı derecede (P < 0.05) arttırdığı tespit edilmiştir.Sonuç olarak; PKOS'lu IVF hastalarının granuloza hücrelerinin kurkumin ile inkübasyonunda hücrelerinin canlılığının P<0,05 düzeyinde anlamlı derecede azaldığı tespit edilmiştir.Bu çalışma, PKOS hastalarına ait oositlerin in vitro olarak kurkumin ile inkübasyonunun insan granuloza hücrelerinde hücre kültürü düzeyinde incelendiği ilk çalışmadır ve uzun vadede PKOS hakkında yapılacak olan çalışmalara fayda sunması amaçlanmıştır.

The aim of this study is to investigate the effect of Curcuma Longa plant molecule, curcumin on proliferation and apoptosis of granulosa cells of polycystic ovary syndrome (PCOS) in vitro fertilization (IVF) patients (PKG) and IVF patients with ovarian health (HG). In this study, granulosa cells obtained from oocytes taken from a total of 20 patients, 10 PKG and 10 HG from Ota Jinemed Hospital IVF Center; In order to determine the viability of the cells through trypan blue staining, determination of the proliferative capacity and metabolic activity levels of the cells by MTT method, and the ratio of apoptotic cells by acridine orange / ethidium bromide staining were examined by fluorescence microscopy. In the light of the findings, statistical analysis was performed with one-way ANOVA and Tukey multiple comparison test.In the 24 hour incubation, it was found that 1 µg/mL Curcumin concentration in the HG group had a protective effect by delaying cell death; high concentrations did not cause any toxic effect and viability rate was close to 100%. On the other hand, the same conditions were found to have different apoptotic / nectoric effects on granulosa cells in the PKG group. It was found that the viability of PKG group granulosa cells decreased significantly at P <0.05 level in 1 µg/mL curcumin incubation, and the viability of PKG group granulosa cells increased significantly (P <0.05) in high dose 100 µg/mL incubation.As a result; it was found that the viability of the cells decreased significantly (P<0.05) in the incubation of granulosa cells with curcumin in IVF patients with PCOS.This is the first study investigating in vitro curcumin incubation of granulosa cells from PCOS patients' oocytes in cell culture level and is thought to be beneficial for long-term PCOS studies.